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曾骏文

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期刊论文

永生化人晶状体上皮细胞细胞周期调控相关基因表达的检测

曾骏文吴明星李绍珍高劲松刘奕志

中华眼科杂志,2002,38(6):367-372,-0001,():

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摘要/描述

目的 探讨人类晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)周期调控中的细胞周期蛋白E、细胞周期蛋白激酶(cyclin dependent kinase 2,CDK2)和细胞周期蛋白激酶抑制因子(cyclindependent2kinase inhibitor,CKI) p21基因的表达,阐明HLEC增殖和晶状体后囊膜混浊(posterior capsule opacification,PCO)的分子机制。方法 体外培养永生化HLEC系HLE-B3,用二步过量胸苷阻断法进行细胞周期同步化;流式细胞仪检测细胞周期;收集不同时相的细胞提取总RNA。用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测细胞周期蛋白E、CDK2和p21的mRNA表达;分别用免疫组织化学染色和Western blot法检测细胞周期蛋白E和CDK2及p21的蛋白表达。结果 流式细胞仪检测:HLE-B3细胞周期处于G1期,占33.5%;S期,占46.1%;G2期,占20.4%;处于S期及G2期细胞的比例约占总数的66.5%。RT-PCR检测:可见不同周期时相的HLE-B3细胞(细胞周期蛋白E和CDK2)mRNA的表达,但在不同步化的细胞时相中未检测出细胞周期蛋白E的表达。而在同步化的S期细胞中有少许p21mRNA表达。免疫组织化学染色未检测出细胞周期蛋白E阳性细胞,仅可检测出少部分p21阳性细胞。Western blot法检测结果:CDK2阳性表达以S期细胞明显,G1期和G2期略低于S期表达。不同步化细胞也有CDK2的表达。提示细胞周期蛋白E、CDK2与p21的mRNA蛋白表达不平衡。结论体外培养HLE-B3细胞周期过程中存在细胞周期蛋白E、CDK2和p21的表达,且存在表达不平衡。细胞周期蛋白E、CDK和CKI间的表达不平衡有可能是其体外增殖细胞周期分子机制之一。

【免责声明】以下全部内容由[曾骏文]上传于[2005年03月16日 00时01分11秒],版权归原创者所有。本文仅代表作者本人观点,与本网站无关。本网站对文中陈述、观点判断保持中立,不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考,并请自行承担全部责任。

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