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崔浩

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期刊论文

大鼠角膜碱烧伤后差异表达基因的变化及相应基因克隆

崔浩李雪徐锦堂胡琦杨晨霞

中华眼科杂志,2005,41(10):905~909,-0001,():

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摘要/描述

目的 探讨大鼠角膜碱烧伤后差异基因表达情况,克隆目的基因片段并了解其同源性,检测有无新基因产生,从分子角度阐明角膜碱烧伤后变性蛋白产生的分子生物学基础。方法 采用异硫氰酸胍法提取大鼠角膜碱烧伤后3d和2周的角膜RNA,合成双链cDNA。分别以正常角膜和碱烧伤角膜的cDNA为模板,应用2种锚定引物和12种随机引物,进行24种不同引物组合的差异显示反转录聚合酶链反应(DDRT-PCR),对目的基因进行克隆、克隆鉴定、测序及同源性分析。结果在相同PCR 反应条件下,同正常角膜相比,碱烧伤2周的角膜产生1条差异性条带,分子量为630 bp。对该片段进行克隆和测序,并与Gene Bank进行同源性的比较,发现该基因与大鼠线粒体细胞色素C氧化酶的亚单位Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的基因具有部分同源性。结论 大鼠碱烧伤2 周的角膜有差异基因产生,与大鼠线粒体细胞色素C氧化酶的亚单位Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ具有部分同源性。该差异基因的产生可能与角膜碱烧伤后超氧自由基的作用有关。

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