目的 构建含HIV-1Tat基因重组反转录病毒表达载体及评价表达Tat蛋白的功能。方法 使用HindⅢ将HIV-1Tat101蛋白编码基因从pEV质粒中切出，插入到表达质粒LZRSpBMN-Z中，构建成重组反转录病毒表达质粒LZRS-Tat101。采用磷酸钙转染法将重组质粒LZRS-Tat101转染进含反转录病毒env、gal和pol编码基因的包装细phoenix（ΦNX）中，嘌呤霉素筛选获得稳定细胞系。免疫组化（IHC）染色检查Tat在临时转染和稳定转染ΦNX细胞中的表达水平。收集临时转染和稳定转染包装细胞分泌的病毒上清，并分别感染293细胞，Westernblot检测Tat在293中表达。与此同时，收集感染293细胞培养上清，加入到HL3T1细胞（HeLa-HIV-1-LTR/CAT报告基因）中，共培养72h后收集细胞，提取蛋白作CAT活性检测。结果 ①含Tat101基因重组反转录病毒表达质粒转染包装细胞后，Tat在临时转染ΦNX中表达水平显著高于在稳定转染中的水平；②临时转染病毒感染293细胞，Tat在感染细胞中得到了表达，且分泌至上清中的Tat蛋白能够激活靶细胞HL3T1中HIV-1的LTR启动子，使得其下游的CAT基因得到表达。结论 重组LZRS-Tat101反转录病毒能够在其感染靶细胞中表达Tat蛋白，且表达蛋白具有转录激活功能。