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期刊论文
RNA干扰人端粒酶逆转录酶基因抑制Hep-2细胞生长增殖的实验研究
Chin J Pathol, December 2005, Vol 34, No.12,-0001,():
目的 探讨RNA干扰人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因对Hep-2细胞生长增殖的抑制作用及诱导凋亡作用。方法 根据hTERT cDNA序列构建表达hTERTmRNA特异的、含荧光素基因的shRNA真核表达质粒p shRNA1、p shRNA2。随机选取一段与人类基因无同源性的碱基序列构建表达shRNA的含荧光素基因的质粒p shRNA3。构建不表达shRNA的含荧光素基因的对照质粒p shRNA4。实验分为5组:A(p shRNA1)、B(p shRNA2)、C(p shRNA3)、D(p shRNA4)、E (空白培养液)。酶切后电泳分析鉴定质粒p shRNA1~3。采用共聚焦显微镜检测质粒转染后细胞荧光表达情况;以蛋白印迹法研究hTERT表达变化;以TRAP2PCR EL ISA 法研究端粒酶活性变化;以四甲基偶氮唑盐(MTT)法、倒置相差显微镜及原位细胞凋亡法观察各质粒抑制细胞增殖及诱导凋亡作用。结果(1)质粒p shRNA1~3 SalⅠ酶切后电泳见400 bp小带,与预期插入的目的基因大小一致。共聚焦显微镜下见大量的细胞表达绿色荧光。(2) p shRNA1、2转染细胞后hTERT表达显著降低;细胞端粒酶活性明显受到抑制,A组细胞活性为: 01159 ±01039、B组细胞活性为01163 ±01028、E组细胞活性为11512 ±01076。A、B组与E组比较,差异均有统计学意义(P < 0101) 。(3)与E组细胞吸光度(A )值比较,A、B组细胞各时间点均减小, P值均小于0101。同等培养条件下,A、B组脱落瓶壁的死亡细胞显著增多,凋亡率明显升高。结论 (1)靶向hTERTmRNA的shRNA真核表达质粒能有效转染Hep22细胞; (2) RNA干扰hTERT能显著地抑制Hep22细胞的生长增殖并诱导细胞凋亡。
【免责声明】以下全部内容由[陶泽璋]上传于[2006年08月16日 23时22分30秒],版权归原创者所有。本文仅代表作者本人观点,与本网站无关。本网站对文中陈述、观点判断保持中立,不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考,并请自行承担全部责任。
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