目的建立骨髓问充质干细胞（MMSC）单细胞克隆，筛选具有心肌特异性分化潜能的c-kit+MMSC克隆，进行体外心肌诱导分化研究。方法取成年雄性SD大鼠骨髓细胞，进行原代培养和单克隆培养。通过c-kit免疫细胞化学标记和RT-FCR检测，筛选出向心肌特异性分化的MMSC克隆。然后用5-氮杂胞苷诱导分化，RT-PCR检测诱导前后心肌特异性基因表达的变化。结果骨髓中含有多种MMSC克隆，以不同形态和大小的成纤维细胞样克隆数目最多。较大的戚纤维细胞样克隆和扁平多角形细胞克隆均表达c-kit。用5-氮杂胞苷诱导后，表达Nkx2.5的c-kit+MMSC克隆的细胞形态和排列方式发生变化。诱导后2周，细胞变为短柱状，且平行排列；第3周，相邻细胞间形成明显的细胞连接；第4周，由多个细胞相互连接形成肌管样结构，井可观察到肌管的自发性搏动。心室肌特异性肌球蛋白轻链（MLc-2v）mRNA从第3周开始明显表达。结论骨髓中含有多种干细胞克隆。筛选具有心肌特异性分化潜能的MMSC克隆并构建心肌干细胞库，将为临床干细胞移植治疗心肌梗死提供理想的干细胞来源。