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翁心华
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期刊论文
结核分支杆菌KatG蛋白的高表达与纯化
中华传染病杂志，2000，18（1）：17～19，-0001，（）：
目的 表达与纯化结核分支杆菌katG蛋白，为深入研究异烟肼耐药机制奠定基础。方法将含有KatG基因的PEt24b-katG表达载体转化大肠杆菌BL21 (DE3) 菌株，在异丙基硫代-β-D半乳糖苷（IPTG）诱导下表达，分别对不同诱导时司的表达产物进行SDS-PAGE以及考马斯亮蓝染色。获得稳定的高表达菌株后采用Xpress TM蛋白纯化系统对超声破菌液进行纯化。最后对纯化产物进行过氧化氢酶活性的初步检测。结果 对诱导后的重组大肠杆菌菌液进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）以及考马斯亮蓝染色后发现相对分子质量约为80000。表达蛋白量约占总蛋白量的17.7%。对重组KatG基因表达产物进行纯化的结果发现，以350mmol/L咪唑洗联时的纯化效果最理想，蛋白纯度可达99%以上。对表达产物进行过氧化氢酶活性初步检测证明，重组的katG基因产物具有过氧化氢酶活性。结论通过PET24b-katG表达质粒转化大肠杆菌可获得基因重组的katG高表达菌株，表达产物具有一定酶活性，经纯化后可达到较高的纯度。
【免责声明】以下全部内容由[翁心华]上传于[2005年01月28日 21时56分23秒]，版权归原创者所有。本文仅代表作者本人观点，与本网站无关。本网站对文中陈述、观点判断保持中立，不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考，并请自行承担全部责任。
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