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期刊论文
人血管内皮生长因子165基因转染对C17.2神经干细胞体外增殖分化的影响*☆
中国临床康复,2005,13(9),50-53,-0001,():
目的:构建含有人血管内皮生长因子165基因的重组腺病毒载体,并观察其对C17.2神经干细胞体外增殖和分化的影响。方法:将血管内皮生长因子165基因克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,经酶切线性化后,与腺病毒骨架质粒pAdEasy共同转染大肠杆菌BJ5183同源重组获得重组腺病毒质粒,将线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞包装获得有感染能力但复制缺陷的重组腺病毒pAdCMV血管内皮生长因子165,转染体外培养的C17.2神经干细胞。以单纯携绿色荧光蛋白腺病毒转染为对照1组。通过酶联免疫吸附测定检测其在C17.2神经干细胞中不同时间段的表达。C17.2神经干细胞培养24h后,将pAdCMV GFP和pAdCMV血管内皮生长因子165转染C17.2神经干细胞(pAdCMV绿色荧光蛋白和pAsCMV血管内皮生长因子165转染组),24,48,72h后每孔加入四氮唑盐10μL,检测pAdCMV转染对C17.2神经干细胞增殖的影响。将未进行pAdCMV绿色荧光蛋白,pAdCMV血管内皮生长因子165转染C17.2神经干细胞设为对照2组。收集C17.2神经干细胞(C17.2神经干细胞组)和已经转染pAdCMV VEGF165的C17.2神经干细胞(pAdCMV血管内皮生长因子165的C17.2神经干细胞组),对两组细胞进行培养,将上术细胞爬片进行多聚醛固定,行巢蛋白和神经元特异性烯醇化酶免疫组化法检测。结果:①重组腺病毒AdCMV血管内皮生长因子165在293细胞中包装成功,病毒滴度达2×1011efu/L。酶联名疫吸附检测转染pAd血管内皮生长因子165的C17.2神经干细胞上清VEGF浓度显示转染后第3天为(710±82)ng/L,明显高于转染前(118±20)ng/L,第5天和第7天血管内皮生长因子165达分泌高峰,分别为(1110±126)ng/L,(1135±138)ng/L,此后渐下降,于第13天(355±35)ng/L仍显著高于对照1组(110±22)ng/L和转染前(t=5。87,P《0.01》。②C.2神经干细胞培养24,48,72h后对照2组干细胞增殖率分别为(0.1367±0.186)%,(0.3300±0.0134)%,(0.373±0.0136)%,pAdCMV绿色荧光蛋转染组C17.2神经干细胞24,48,72h后干细胞的增殖率分别为(0.635±0.0247)%。两个实验组神经干细胞增殖率与对照组1组比较,P>0.05。pAdCMV血管内皮生长因子165转染组(C17.2神经干细胞增殖率与pAdCMV绿色荧光蛋白转染组比较,P>0.05)。③C17.2神经干细胞组和pAdCMV血管内皮生长因子165转染C17.2神经干细胞组组的巢蛋白阳性细胞率分别为(15.7±1.003)%,(17.63±1.082)%,神经元特异性烯醇化酶阳性细胞率分别为(17.63±1.082)%,(21.49±1.022)%,两组比较无明显差异(p>0.05)。结论:成功构建pAdCMV血管内皮生长因子165重级腺病毒,获得了稳定表达血管内皮生长因子165的神经干细胞克隆,体外pAdCMV血管内皮生长因子165未对C17.2神经干细胞增殖和分化产生影响。
【免责声明】以下全部内容由[邢诒刚]上传于[2006年01月12日 17时47分13秒],版权归原创者所有。本文仅代表作者本人观点,与本网站无关。本网站对文中陈述、观点判断保持中立,不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考,并请自行承担全部责任。
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