目的　建立从人肾癌组织中提取、纯化热休克蛋白（HSP）gp962肽复合物的方法，并检测其体外免疫效应。方法　采取三步蛋白纯化法从人肾癌患者肿瘤组织中提取、纯化HSPgp962肽复合物，SDS2PAGE、Western blot鉴HSPgp962肽复合物。应用酶联免疫斑点（EL ISPOT）法检测HSPgp962肽复合物、单纯多肽产生γ2干扰素效应T细胞频数的体外免疫活性。结果　应用该方法提取的蛋白质经SDS2PAGE和Western blot特异性鉴定，证实是HSPgp962肽复合物；蛋白得率为每g湿重肾癌组织可纯化HSPgp962肽复合物40～60μg。γ2干扰素EL ISPOT检测，HSPgp962肽复合物组产生γ2干扰素效应T 细胞频数最高（287.50±22.34），以后依次为单纯多肽组（135.25±12.80）、阳性对照组组（102.25±14.76）、阴性对照组（35.50±11.10），各组与阴性对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）；HSPgp962肽复合物组与单纯多肽组、阳性对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）；单纯多肽组与阳性对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论　三步蛋白纯化法不仅操作简便、重复性高，而且提取的HSPgp962肽复合物具有高获率、高纯度、高特异性及高免疫效应等优点。