中华细胞与干细胞杂志(电子版)
论文题目：多能成体祖细胞培养条件促进人脂肪干细胞的视网膜神经保护功能
全部作者： 娄慧,徐国旭
期刊名称：中华细胞与干细胞杂志(电子版) 2014年第1期
论文摘要：目的 检测多能成体祖细胞(MAPC)的培养条件对猴骨髓间充质细胞(BMMSCs)和人脂肪干细胞(hADSCs)生长的影响,旨在获得更适合治疗视网膜变性疾病的供体细胞。方法 通过细胞形态观察、MTT实验、克隆形成率、PCR检测、以及成脂、成骨、成软骨分化潜能检测等....[查看全部]
论文摘要：目的 检测多能成体祖细胞(MAPC)的培养条件对猴骨髓间充质细胞(BMMSCs)和人脂肪干细胞(hADSCs)生长的影响,旨在获得更适合治疗视网膜变性疾病的供体细胞。方法 通过细胞形态观察、MTT实验、克隆形成率、PCR检测、以及成脂、成骨、成软骨分化潜能检测等,研究MAPC培养条件下猴BMMSCs和hADSCs的特征,并用DMEM/LG和MAPC培养条件培养的hADSCs进行RCS大鼠视网膜下腔移植,通过视网膜电图(ERG)和TUNEL检测,判断细胞移植治疗对视功能及视网膜细胞凋亡的影响。结果 与常规培养基相比,MAPC培养条件能促进猴BMMSCs增殖,细胞变小,但传2代后,细胞变得宽大扁平,出现衰老征象;然而,MAPC培养条件下的hADSCs细胞增殖能力及克隆形成率均增强,形成的克隆较大可稳定传10代以上,且具有成脂、成骨、成软骨的多向分化潜能,细胞表面标记物及细胞因子出现差异表达:CD140b、CD90、CD47、HGF和PEDF显著上调,CD73、CD105和IL-6显著下调。与对照组相比,移植DMEM/LG和MAPC培养条件培养的hADSCs(P4)3周后,RCS大鼠的B波波幅明显升高,外核层细胞凋亡明显减少。结论 MAPC培养条件培养的hADSCs显示出更好的视网膜神经保护作用,适合用于治疗视网膜退行性疾病。[返回]
下载频数：10 上传时间：2014-07-25
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论文题目：mTOR信号通路在iPS定向分化RPE细胞中的调控机制研究
全部作者： 蒋超,石厚霞,丁思加,赵晨
期刊名称：中华细胞与干细胞杂志(电子版) 2014年第1期
论文摘要：目的 探讨mTOR信号通路在iPS定向分化RPE细胞中的调控机制。方法 培养iPS细胞,悬浮培养后形成拟胚体EB,诱导分化为RPE细胞。通过免疫细胞化学的方法,观察iPS-RPE细胞分化一个月后特异性蛋白 蛋白 (RPE65、LRAT、zo-1)的表达。同时通过Q-PCR,Western Blotting的方法....[查看全部]
论文摘要：目的 探讨mTOR信号通路在iPS定向分化RPE细胞中的调控机制。方法 培养iPS细胞,悬浮培养后形成拟胚体EB,诱导分化为RPE细胞。通过免疫细胞化学的方法,观察iPS-RPE细胞分化一个月后特异性蛋白 蛋白 (RPE65、LRAT、zo-1)的表达。同时通过Q-PCR,Western Blotting的方法检测 iPS-RPE在不同分化时间点(分化1个月、2个月、3个月)上,iPS-RPE细胞中特异性基因、蛋白 蛋白 的表达变化以及mTOR信号通路的活性。最后应用雷帕霉素抑制iPS-RPE细胞中mTOR的通路,进一步观察iPS-RPE细胞中的蛋白 蛋白 表达变化。Q-PCR采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)进行组间比较。结果 荧光显微镜观察到iPS-RPE细胞在分化1个月时,表达RPE65、LRAT、zo-1蛋白 蛋白 。与对照组iPS比较,Q-PCR结果显示,实验组RPE65在分化1个月,2个月,3个月时的表达量分别为0.84± 0.13,4.8± 1.1,20.3± 4.9(P = 0.000);Best1分化1个月,2个月,3个月时的表达量分别为1.5± 0.16,2.3± 0.68,11.78± 1.57(P = 0.000);MerTK在分化1个月,2个月,3个月时的表达量分别为4.12± 1.94,1.87± 0.76,15.53± 1.33(P = 0.000),CK18分化1个月,2个月,3个月时的表达量分别为2.4± 0.63,2.3± 0.37,9.67± 1.44(P = 0.000),Western Blotting结果也表明,随着分化时间延长,iPS-RPE细胞中特异性蛋白 蛋白 (BEST1、catenin、MerTK)表达量有显著提高,而mTOR信号通路的活性受到抑制。与对照组(加DMSO)比较,雷帕霉 素处理获得的iPS-RPE细胞中BEST1、MerTK 、ck18蛋白 表达量上升不是很明显,catenin蛋白 蛋白 显著提高。结论 建立了体外高等分化、功能高效的iPS-RPE细胞,随iPS-RPE细胞分化时间延长,mTOR信号通路的活性是逐步抑制的。[返回]
下载频数：8 上传时间：2014-07-25
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论文题目：EPO修饰增强Müller细胞对RCS大鼠视网膜变性的干预效果
全部作者： 李宗义,李鹏,高芙蓉,范氏雪幸,张敬法,王方,吕立夏,徐国彤
期刊名称：中华细胞与干细胞杂志(电子版) 2014年第1期
论文摘要：目的 研究人源促红细胞生成素(hEPO)修饰的Müller(hEPO-Müller)细胞对视网膜退行性病变大鼠的干预作用。方法 通过质粒转染法构建hEPO和GFP的Müller细胞稳转株(hEPO-Müller和GFP-Müller);以体外共培养和体内细胞移植为研究体系,利用RT-PCR和冰冻切片及免疫荧光染....[查看全部]
论文摘要：目的 研究人源促红细胞生成素(hEPO)修饰的Müller(hEPO-Müller)细胞对视网膜退行性病变大鼠的干预作用。方法 通过质粒转染法构建hEPO和GFP的Müller细胞稳转株(hEPO-Müller和GFP-Müller);以体外共培养和体内细胞移植为研究体系,利用RT-PCR和冰冻切片及免疫荧光染色的方法检测 hEPO-Müller对RCS大鼠视网膜退行性病变的干预作用。内核层与外核层厚度比较采用t检验。结果 本实验成功构建了hEPO-Müller和GFP-Müller细胞系。将RCS大鼠的视网膜组织剥离并在体外不同条件下培养两周后测定视网膜各核层厚度发现,与对照细胞裂解液共培养组的内核层(15.94± 1.77)μm和外核层(24.81± 3.03)μm的厚度相比较,两核层的厚度分别在hEPO组为(23.03± 3.29)μm,(33.92± 7.59)μm(P < 0.05);Müller组为(24.81± 2.02)μm,(32.15± 3.03)μm(P < 0.05);hEPO-Müller 组为(32.40± 8.35)μm,(40.25± 3.29)μm(n=3,P < 0.01);以hEPO-Müller 组厚度增加最为显著(P < 0.05)。提示EPO和Müller细胞对视网膜变性都有干预作用且两者可以叠加。将hEPO-Müller和GFP-Müller 分别移植到RCS大鼠的视网膜下腔,四周后取视网膜进行冰冻切片检测,染色结果显示,细胞移植后有更多的外核层细胞存活,且同样也是hEPO-Müller组的外核层细胞更多。此外,Müller移植并不会促进视网膜的胶质化。结论 移植Müller细胞可以减缓RCS大鼠视网膜变性,而经hEPO修饰的Müller细胞对视网膜变性有更好的干预作用。因此,Müller细胞可以作为一种供体细胞兼携带hEPO等营养因子的载体用于视网膜变性的治疗。[返回]
下载频数：17 上传时间：2014-07-25
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