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人CD7胞外区慢病毒载体的构建及其稳转细胞系的构建、表达和纯化

Lentiviral vector construction, expression & purification from stably transfected cell line of human CD7 extracellular domain

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李甲璐,汤金乐,于远,杨林

(苏州大学唐仲英血液学研究中心 & 血液学协同创新中心)

摘要:为筛选能够识别具有天然构象的CD7单克隆抗体或者纳米抗体,有必要建立CD7分子的分泌型表达哺乳动物稳定细胞株来纯化糖基化CD7抗原蛋白,以此作为抗体筛选用抗原。研究通过提取Jurkat细胞总RNA,经RT-PCR扩增获得目的片段CD7-EX,并直接构建到慢病毒载体上,从而获得了带有His标签的慢病毒重组表达载体pCDH-CMV-copGFP-CD7-EX. 通过包装慢病毒,转染293T细胞系,命名为293T-GFP-CD7-EX. 经Western blotting鉴定,该His-CD7-EX融合蛋白可与His标签抗体特异性结合,表明融合蛋白可在构建的细胞系中表达。然后用无血清培养基培养293T-GFP-CD7-EX细胞,收集培养上清,对上清进行亲和层析纯化,纯化产物经考马斯亮蓝染色鉴定后得到证实。结果显示,成功构建了能够持续分泌表达CD7胞外区片段的稳转细胞系,并经过纯化获得了CD7胞外区重组蛋白。

关键词:蛋白质工程;CD7胞外区(CD7-EX);稳转细胞系;真核表达;蛋白纯化

该论文研究获得的稳定转染细胞系和纯化重组CD7蛋白具有实际应用价值。数据充足,真实可信,推荐为年度优秀论文。

综合指数: 59

推荐指数:79
关注指数:75
动态指数:16

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