信号肽对耐热β-半乳糖苷酶在枯草芽孢杆菌中表达的影响

王双辉; 王光强; 陈海琴; 张灏; 陈卫

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信号肽对耐热β-半乳糖苷酶在枯草芽孢杆菌中表达的影响

首发时间：2010-09-27

王双辉 ¹
王双辉（1985-），男，硕士研究生，主要研究方向为食品生物技术。
王光强 ¹ 陈海琴 ¹ 张灏 ¹
张灏（-），男，教授，食品生物技术
陈卫 ¹
陈卫（1966-），男，教授，主要研究方向为食品生物技术

1、江南大学食品学院，食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡 214122

摘要：本文以来源于嗜热脂肪芽胞杆菌(Bacillus stearothermophilus)的耐热β-半乳糖苷酶基因bgaB为目标基因，构建了三种分泌表达载体，研究了不同信号肽对耐热β-半乳糖苷酶表达的影响。将耐热β-半乳糖苷酶基因bgaB克隆到分泌表达载体pMALipB-lipA和pMAWprA-lipA的EcoRI和BamHI位点，以替换掉原来的lipA基因，从而获得分泌表达载体pMALipB-bgaB和pMAWprA-bgaB；再将NprE信号肽克隆到pMALipB-bgaB中，以替换掉LipB信号肽，得到另一分泌表达载体pMANprE-bgaB。构建的三种BgaB分泌表达载体转入枯草芽孢杆菌WB600中，分别得到重组菌株WB600(pMALipB-bgaB)，WB600(pMAWprA-bgaB)和WB600(pMANprE-bgaB)。实验结果显示，各重组菌耐热β-半乳糖苷酶表达差异非常显著，其中WB600(pMANprE-bgaB)有较高的表达，酶活可达0.40 U/ml，WB600(pMAWprA-bgaB)表达较低，最高酶活仅0.04U/ml，而WB600(pMALipB-bgaB)无法检测到乳糖酶活性。信号肽对BgaB的表达存在较大的影响，有些情况会致使表达失败。

关键词：耐热β-半乳糖苷酶信号肽枯草芽孢杆菌表达

For information in English, please click here

Effect of Different Signal Peptides on the Expression of the Thermostable β-galactosidase in Bacillus Subtilis

WANG Shuanghui ¹
王双辉（1985-），男，硕士研究生，主要研究方向为食品生物技术。
WANG Guangqiang ¹ CHEN Haiqin ¹ ZHANG Hao ¹
张灏（-），男，教授，食品生物技术
CHEN Wei ¹
陈卫（1966-），男，教授，主要研究方向为食品生物技术

1、School of Food Science and Technology, Jiangnan University,State Key Laboratory of Food Science and Technology，Jiangsu Wuxi 214122，China

Abstract：In this study, we constructed three expression-secretion vectors for Bacillus subtilis in which the thermostable β-galactosidase bgaB gene origining from Bacillus stearothermophilus was used as the target gene. The effect of signal peptides on the expression level of β-galactosidase was evaluated .The bgaB gene was cloned into pMAlipB-lipA and pMAWprA-lipA between EcoRI and BamHI. The lipA gene was replaced by bgaB. Two expression-secretion vectors pMALipB-bgaB and pMAWprA-bgaB were succefully constructed. We also cloned the NprE signal peptides into pMAlipB-bgaB to replace the LipB signal peptide, another expression-secretion vector pMANprE-bgaB was constructed. Finally, these three vectors were transformed into Bacillus subtilis WB600, getting three recombinants WB600(pMALipB-bgaB), WB600(pMAWprA-bgaB) and WB600(pMANprE-bgaB). The level of expression of BgaB was quite different in the three recombinants: WB600(pMANprE-bgaB) expressed β-galactosidase at a highest level among these recombinants, reaching 0.40U/ml; WB600(pMAWprA-bgaB) expressed BgaB with a low activity, only 0.04U/ml; however, the expression of BgaB in WB600(pMAWprA-bgaB) was not detected . These phenomenon indicated that signal peptides have a great influence on the expression of BgaB, even fail to express BgaB.

Keywords： thermostable β-galactosidase signal peptide Bacillus subtilis expression

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王双辉，王光强，陈海琴，等. 信号肽对耐热β-半乳糖苷酶在枯草芽孢杆菌中表达的影响[EB/OL]. 北京：中国科技论文在线 [2010-09-27]. https://www.paper.edu.cn/releasepaper/content/201009-579.

No.4386267538878128****

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论文编号	201009-579
论文题目	信号肽对耐热β-半乳糖苷酶在枯草芽孢杆菌中表达的影响
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