人PSF蛋白的原核表达及分析鉴定

王慧娟; 兰洋; 刘涛; 李灵

0
0
浏览
下载

摘要
关键词
基金信息
论文图表
同行评议
相关论文
评论

人PSF蛋白的原核表达及分析鉴定

首发时间：2010-12-22

王慧娟 ¹
王慧娟（1985），女，研究生，长非编码RNA
兰洋 ¹ 刘涛 ¹ 李灵 ^{1
2}
李灵（1980），男，助理研究员，主要研究方向：长非编码RNA

1、四川大学生命科学学院功能基因组实验室，成都 610064
2、海南医学院海南省热带病重点实验室，海口 571101

摘要：PSF(polypyrimidine tract binding protein-associated splicing factor, PSF)蛋白是一种多功能的DNA/RNA结合蛋白，它能够抑制原癌基因的表达，在人和小鼠中具有肿瘤抑制的作用。以人成纤维细胞总RNA为材料，利用PSF特异性引物通过RT-PCR的方法扩增得到PSF蛋白的编码序列，将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中构建重组表达质粒pET-28-PSF，转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。SDS-PAGE及免疫印记分析表明PSF能够在大肠杆菌中以可溶形式表达。同时凝胶阻滞分析显示原核表达的PSF重组蛋白在体外条件下能够与mVL30-1 RNA结合，说明PSF的原核表达产物具有生物学活性，这为进一步研究PSF蛋白的生物学功能奠定了基础。

关键词： PSF蛋白肿瘤原核表达

For information in English, please click here

Prokaryotic Expression, Analysis and Identification of Human Polypyrimidine Tract Binding Protein-associated Splicing Factor (PSF)

WANG Huijuan ¹
王慧娟（1985），女，研究生，长非编码RNA
LAN Yang ¹ LIU Tao ¹ LI Ling ¹
李灵（1980），男，助理研究员，主要研究方向：长非编码RNA

1、Functional Genome Laboratory, College of Life Science, Sichuan University, Chengdu 610064

Abstract：Polypyrimidine tract binding protein-associated splicing factor (PSF), a multifunctional RNA/DNA-binding protein, can suppress the expression of proto-oncogene and function as tumor suppressor protein (TSP) in human and mouse. Using total RNA extracted from human fibroblasts as material, PSF-encoding cDNA was synthesized and inserted into vector pET-28a(+) to construct the recombinant plasmid pET-28-PSF. The PSF fused with His-tag was expressed in E.coli BL21 (DE3) by IPTG induction and then purified by affinity chromatography. The results of SDS-PAGE and Western blotting indicated the dissoluble His-tagged PSF could be produced with prokaryotic expression system. At last, the RNA-binding capacity of recombinant PSF to mVL30-1 RNA was determined by Gel-shift assay. Our results showed that recombinant PSF with biological activity can be produced with prokaryotic expression system, which will be the foundation of in-depth research on its function.

Keywords： PSF tumor prokaryotic expression

基金：

论文图表：

引用

导出参考文献

.txt

.ris

.doc

王慧娟，兰洋，刘涛，等. 人PSF蛋白的原核表达及分析鉴定[EB/OL]. 北京：中国科技论文在线 [2010-12-22]. https://www.paper.edu.cn/releasepaper/content/201012-878.

No.4398144558932129****

同行评议

共计0人参与

全部评论

0/1000

论文编号	201012-878
论文题目	人PSF蛋白的原核表达及分析鉴定
文献类型
收录期刊	上传封面中文期刊英文期刊期刊名称（中文）期刊名称（英文）年，卷（）上传封面中文专著英文专著书名（中文）书名（英文）出版地出版社出版年上传封面中文译著英文译著书名（中文）书名（英文）出版地出版社出版年上传封面中文论文集英文论文集编者.论文集名称（中文） [c]. 出版地出版社出版年， - 编者.论文集名称（英文） [c]. 出版地出版社出版年，- 上传封面中文文献英文文献期刊名称（中文）期刊名称（英文）日期-- 在线地址http:// 上传封面中文文献英文文献文题（中文）文题（英文）出版地出版社,出版日期-- 上传封面中文文献英文文献文题（中文）文题（英文）出版地出版社,出版日期--
英文作者写法：中外文作者均姓前名后，姓大写，名的第一个字母大写，姓全称写出，名可只写第一个字母，其后不加实心圆点“.”, 作者之间用逗号“，”分隔，最后为实心圆点“.”, 示例1：原姓名写法：Albert Einstein,编入参考文献时写法：Einstein A. 示例2：原姓名写法：李时珍；编入参考文献时写法：LI S Z. 示例3：YELLAND R L,JONES S C,EASTON K S,et al.