FLAG标记的Kir2.3通道的构建、表达及其对Kir2.3通道功能的影响

赵志英; 张哲; 刘丽; 张国红

0
0
浏览
下载

摘要
关键词
基金信息
论文图表
同行评议
相关论文
评论

FLAG标记的Kir2.3通道的构建、表达及其对Kir2.3通道功能的影响

首发时间：2012-11-13

赵志英 ¹
赵志英，（1975-），女，副教授，研究方向：离子通道药理学。
张哲 ² 刘丽 ³ 张国红 ³

1、河北医科大学药理教研室，教育部血管与神经生物学重点实验室，河北省新药药理毒理研究重点实验室，石家庄 050017
2、河北省人民医院，临床医学研究中心，河北省老年医学重点实验室，河北石家庄 050000
3、河北医科大学药理教研室，教育部血管与神经生物学重点实验室，河北省新药药理毒理研究重点实验室，河北石家庄 050017

摘要：目的：构建FLAG标记的Kir2.3通道蛋白，为进一步研究通道的生理功能和调节机制奠定基础。方法：运用聚合酶链式反应（PCR）技术，将FLAG标记短肽DNA碱基序列插入到Kir2.3通道氨基末端，构建重组质粒DNA：FLAG-Kir2.3-pGEMHE，采用菌落PCR方法挑取阳性克隆；表达于非洲爪蟾卵母细胞，验证加入标记后，是否影响Kir2.3通道蛋白的功能；进行免疫细胞化学实验，检测FLAG标记短肽表达情况。结果：经测序验证，FLAG-Kir2.3-pGEMHE重组质粒DNA构建成功，没有碱基突变。FLAG标记短肽没有影响Kir2.3通道功能, FLAG-Kir2.3-pGEMHE成功表达于非洲爪蟾卵母细胞，双电极电压钳可以记录到电流。免疫细胞化学实验证实FLAG标记短肽表达。结论：成功构建重组质粒DNA，FLAG标记短肽已与Kir2.3通道蛋白成功融合并有效表达。

关键词：分子药理学 DNA重组 Kir2.3 FLAG

For information in English, please click here

Construction of FLAG tagged Kir2.3 channel, its expression and functional study

ZHAO Zhiying ¹
赵志英，（1975-），女，副教授，研究方向：离子通道药理学。
ZHANG Zhe ² LIU Li ³ ZHANG Guohong ³

1、Dept of Pharmacology, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050017
2、The Clinical Trial Center,Hebei Provincial Key Laboratory of Geriatrics,People’s Hospital of Hebei Province, Shijiazhuang 050000, China
3、Dept of Pharmacology, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050017, China

Abstract：Objective: Flag tag will be inserted into the upstream of Kir2.3-pGEMHE DNA sequence, which will laid a basis for future research. Methods: The DNA base sequence corresponding to the amino acid sequence of Flag peptide was inserted into the N-terminal of Kir2.3 by PCR. The recombinant plasmid DNA FLAG-Kir2.3-pGEMHE would be constructed. The correct clones were chosen by the method of colony PCR and sent for sequencing. Flag-Kir2.3 will be expressed in the Xenopus oocytes. Consequence of Flag tagging on the Kir2.3 channel protein function will be studied. Immunocytochemistry method will be applied to confirm that the Flag-Kir2.3 has expressed on the membrane of the Xenopus oocytes. Results: After examination by sequencing, we were sure that the Flag tag had been inserted into the N-terminal of Kir2.3-pGEMHE. FLAG-Kir2.3 was expressed in the Xenopus oocytes successfully. Channel currents were recorded by TEVC. Immunocytochemistry experiments showed that the Flag tag was fused with Kir2.3 channel protein successfully. Conclusion: FLAG-Kir2.3-pGEMHE, is constructed by means of PCR successfully. Moreover, the Flag tagged protein has expressed stably and Kir2.3 channel function is not affected. These results laid a basis for future research.

Keywords： Molecular pharmacology DNA Recombination Kir2.3 FLAG

基金：

论文图表：

引用

导出参考文献

.txt

.ris

.doc

赵志英，张哲，刘丽，等. FLAG标记的Kir2.3通道的构建、表达及其对Kir2.3通道功能的影响[EB/OL]. 北京：中国科技论文在线 [2012-11-13]. https://www.paper.edu.cn/releasepaper/content/201211-208.

No.****

同行评议

共计0人参与

全部评论

0/1000

论文编号	201211-208
论文题目	FLAG标记的Kir2.3通道的构建、表达及其对Kir2.3通道功能的影响
文献类型
收录期刊	上传封面中文期刊英文期刊期刊名称（中文）期刊名称（英文）年，卷（）上传封面中文专著英文专著书名（中文）书名（英文）出版地出版社出版年上传封面中文译著英文译著书名（中文）书名（英文）出版地出版社出版年上传封面中文论文集英文论文集编者.论文集名称（中文） [c]. 出版地出版社出版年， - 编者.论文集名称（英文） [c]. 出版地出版社出版年，- 上传封面中文文献英文文献期刊名称（中文）期刊名称（英文）日期-- 在线地址http:// 上传封面中文文献英文文献文题（中文）文题（英文）出版地出版社,出版日期-- 上传封面中文文献英文文献文题（中文）文题（英文）出版地出版社,出版日期--
英文作者写法：中外文作者均姓前名后，姓大写，名的第一个字母大写，姓全称写出，名可只写第一个字母，其后不加实心圆点“.”, 作者之间用逗号“，”分隔，最后为实心圆点“.”, 示例1：原姓名写法：Albert Einstein,编入参考文献时写法：Einstein A. 示例2：原姓名写法：李时珍；编入参考文献时写法：LI S Z. 示例3：YELLAND R L,JONES S C,EASTON K S,et al.