重叠法联合长引物法构建具有标签的突变体

马幸; 邓梅春; 陈汉春; 朱飞舟

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重叠法联合长引物法构建具有标签的突变体

首发时间：2012-11-15

马幸 ¹
马幸，（1990-），女，硕士研究生，帕金森病的发病机制与治疗。
邓梅春 ¹ 陈汉春 ¹ 朱飞舟 ¹
朱飞舟（1974-），男，副教授，帕金森病的发病机制和治疗

1、中南大学生物科学与技术学院生物化学系，长沙 410013

摘要：目的建立一种快速构建具有标签的突变体的方法。方法以构建具有HA标签的DJ-1 L166P突变体（DJ-1 L166P-HA）为例。DJ-1隶属于ThiJ/PfpI蛋白质家族，DJ-1 L166P突变导致早发的常染色体隐性遗传的帕金森病。采用重叠法联合长引物法, 克隆DJ-1 L166P-HA至pcDNA3.1(+)。结果只需一次连接反应，成功地构建了具有HA标签的DJ-1 L166P突变体。该重组质粒转染HEK293细胞后，DJ-1 L166P-HA融合蛋白质得到表达。结论该方法速度快，易于掌握，较其它方法具有显著优越性。

关键词：生物化学与分子生物学帕金森病 DJ-1 基因克隆

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Cloning of Mutant with Tag by Overlap Method Combined with Long-primer Method

MA Xing ¹
马幸，（1990-），女，硕士研究生，帕金森病的发病机制与治疗。
DENG Meichun ² CHEN Hanchun ² ZHU Feizhou ²
朱飞舟（1974-），男，副教授，帕金森病的发病机制和治疗

1、Department of Biochemistry, School of Biological Science and Technology, Central South University, ChangSha 410013
2、Department of Biochemistry, School of Biological Science and Technology, Central South University, Changsha 410013

Abstract：Objective Introduce a method which can construct mutant with tag rapidly. Methods Take the construction of DJ-1 L166P mutant with HA as an example. DJ-1 belongs to ThiJ/PfpI protein family, and DJ-1 L166P mutation can lead to autosomal recessive early-onset Parkinson's disease. Using overlap method combined with long-primer method, the DJ-1 L166P-HA was cloned to pcDNA3.1(+). Results We have cloned DJ-1 L166P mutant with HA epitope successfully by one time ligation. After the recombinant plasmid transfects HEK293 cell, the DJ-1 L166P-HA fusion protein can be expressed. Conclusions The method has more advantages than others, for it is easy to be mastered and fast to be conducted.

Keywords： Biochemistry and Molecular Biology Parkinson's disease DJ-1 Gene cloning

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马幸，邓梅春，陈汉春，等. 重叠法联合长引物法构建具有标签的突变体[EB/OL]. 北京：中国科技论文在线 [2012-11-15]. https://www.paper.edu.cn/releasepaper/content/201211-274.

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论文编号	201211-274
论文题目	重叠法联合长引物法构建具有标签的突变体
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