酶标板上基于竞争杂交反应的几种miRNA序列的比色检测

张宇; 冯城婷; 张艳军; 胡盛强; 侯小琪; 王建秀

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酶标板上基于竞争杂交反应的几种miRNA序列的比色检测

首发时间：2014-04-28

张宇 ¹
张宇(1990—)，男，硕士研究生，主要研究方向为生物传感
冯城婷 ¹ 张艳军 ¹ 胡盛强 ¹ 侯小琪 ¹ 王建秀 ¹
王建秀（1969—），教授，主要研究方向为生物传感器研发、联用仪器的开发以及重大疾病致病机理研究

1、中南大学化学化工学院，长沙 410083

摘要：多种miRNA序列的同时检测对癌症的预警与早期诊断具有重要的意义。本文基于生物素标记的miRNA和靶点miRNA与酶标板上固定的寡核苷酸探针之间的竞争反应，通过比色法来定量检测三种与胶质瘤相关的miRNA序列，即miR-182，miR-185和miR-381。通过亲和素与生物素之间的特异性相互作用，将亲和素标记的多聚辣根过氧化物酶(SA-poly-HRP）衍生到微孔表面。通过检测HRP催化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺和H2O2的显色反应来对三种靶点miRNA序列进行定量。方法最低检测浓度为10 fmol/L，有望用于临床上miRNA的定量分析。碱基错配的结果表明该方法具有较好的选择性。

关键词： miRNA 竞争杂交比色法同时测定

For information in English, please click here

Colorimetric method for multiplexed miRNA detection on ELISA plates based on competitive hybridization reaction

Zhang Yu ¹
张宇(1990—)，男，硕士研究生，主要研究方向为生物传感
Feng Chengting ¹ Zhang Yanjun ¹ Hu Shengqiang ¹ Hou Xiaoqi ¹ Wang Jianxiu ¹
王建秀（1969—），教授，主要研究方向为生物传感器研发、联用仪器的开发以及重大疾病致病机理研究

1、College of Chemistry and Chemical Engineering, Central South University, Changsha 410083, China

Abstract：Multiplexed miRNA detection is of great importance for early diagnosis of cancers. In this study, a colorimetric method based on the competitive hybridization reaction has been developed in which the biotinylated miRNA (biotin-miRNA) and target miRNA compete for the immobilized oligonucleotide (ODN) probe. Targets miR-182, miR-185 and miR-381 were analyzed using the present method. Relying on the specific interaction between avidin and biotin, complex of avidin-poly-horseradish peroxidase (SA-poly-HRP) was introduced onto the wells of the ELISA plates. The incorporated HRP could catalyze the chromogenic reaction of 3, 3’, 5, 5’-tetramethylbenzidine and H2O2. The method is highly selective, and could determine target miRNAs with concentrations as low as 10 fmol/L, thus holding great potential for clinical miRNA assay.

Keywords： miRNA competitive hybridization colorimetric assay multiplexed detection

基金：

1. 高等学校博士学科点专项科研基金（20100162110018）

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张宇，冯城婷，张艳军，等. 酶标板上基于竞争杂交反应的几种miRNA序列的比色检测[EB/OL]. 北京：中国科技论文在线 [2014-04-28]. https://www.paper.edu.cn/releasepaper/content/201404-394.

No.4594247222691398****

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论文编号	201404-394
论文题目	酶标板上基于竞争杂交反应的几种miRNA序列的比色检测
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