酿酒酵母组成型表达甜叶菊糖基转移酶UGT76G1及相关性质研究

王钰; 陈量量; 杜婷; 李艳; 严明; 郝宁; 许琳

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酿酒酵母组成型表达甜叶菊糖基转移酶UGT76G1及相关性质研究

首发时间：2014-11-03

王钰 ¹
王钰（1988），女，硕士，分子生物学
陈量量 ¹ 杜婷 ¹ 李艳 ¹
李艳（1975），女，副教授，工业生物催化
严明 ¹ 郝宁 ¹ 许琳 ¹

1、南京工业大学生物与制药工程学院，南京 211816

摘要：本研究将酿酒酵母穿梭质粒pESC-Leu的诱导型启动子GAL1和GAL10分别替换为PGK1和TEF1启动子，构建了组成型双启动子表达载体pESCD，再将甜叶菊糖基转移酶UGT76G1的编码基因亚克隆到pESCD的Sal I和Xho I酶切位点之间，构建了组成型表达UGT76G1的重组质粒pESCD-UGT。将pESCD-UGT转化到酿酒酵母YPH499中进行表达，结果确定该重组酵母在SD-L液体培养基培养24 h达到稳定期，菌体培养8 h蛋白表达量高，选用1%的甲苯作为重组菌全细胞催化的通透剂时，催化15 h产生288 mg/L的莱鲍迪甙A，其产量是对照组的5倍。

关键词：组成型启动子糖基转移酶UGT76G1 全细胞催化莱鲍迪甙A

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Constitutive expression and characteristics of glycosyltransferase UGT76G1 in Saccharomyces cerevisiae

Wang Yu ¹
王钰（1988），女，硕士，分子生物学
Chen Lingliang ¹ Du Ting ¹ Li Yan ¹
李艳（1975），女，副教授，工业生物催化
Yan Ming ¹ Han Ning ¹ Xu Lin ¹

1、NanJing University of technology, Biological and Pharmaceutical, NanJing 211816

Abstract：In this study ,we use shuttle plasmid of Saccharomyces cerevisiae .Firstly, we designed and constructed a new expression vector pESC-LeuD which contain the two constitutive promoters, PGK1 and TEF1, to replace the original induced GAL1 / GAL10 promoter. The synthetic glycosyltransferase UGT76G1 coding gene was inserted into the restriction site of Sal I and Xho I of the expression vector pESCD to construct the recombinant plasmid pESCD-UGT, which was then transformed into the Saccharomyces cerevisiae strain YPH499.Results: confirmed the recombinant grow 24 h to stable phase and culture 8 h can express high quantity protein in SD-L. When chosse 1% methylbenzence as the recombinant whole-cell permeating agent, catalytic 15 h could produce 288 mg/L RA.It is 5 times of control group.

Keywords： Constitutive promoters Glycosyl transferase UGT76G1 Whole-cell catalysis Rebaudioside A

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王钰，陈量量，杜婷，等. 酿酒酵母组成型表达甜叶菊糖基转移酶UGT76G1及相关性质研究[EB/OL]. 北京：中国科技论文在线 [2014-11-03]. https://www.paper.edu.cn/releasepaper/content/201411-27.

No.4614356975047141****

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论文编号	201411-27
论文题目	酿酒酵母组成型表达甜叶菊糖基转移酶UGT76G1及相关性质研究
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