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论文编号 201505-60
论文题目 华南象草PpCAD基因的原核表达研究
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华南象草PpCAD基因的原核表达研究

首发时间:2015-05-06

唐然 1   

唐然(1988-),男,博士研究生,主要从事牧草生物技术研究

彭小群 1    江院 1    张向前 1    解新明 1   

解新明(1963-),男,博士,教授,博士生导师,主要从事牧草生物技术及遗传资源研究

  • 1、华南农业大学风景与园林学院,广州 510642

摘要:肉桂醇脱氢酶(Cinnamyl Alcohol Dehydrogenase, CAD)是控制木质素生物合成途径中的最后一步关键酶,对植物的木质素合成调控有十分重要的意义。本文根据已克隆的华南象草PpCAD基因cDNA序列,构建原核表达载体pGEX-PpCAD,转化BL21后诱导融合蛋白GEX-PpCAD表达,并进行诱导体系筛选,以期为PpCAD的体外酶活研究奠定基础。结果表明:在浓度为0.02 mmol/L的IPTG下,28℃诱导1h就能产生少量的可溶性融合蛋白,大小为69 kDa,除去GST大小,PpCAD约40 kDa,与预期结果相符。随着诱导时间的延长,形成包涵体。当IPTG浓度为0.1 mmol/L时,以相同条件诱导5 min就能产生包涵体融合蛋白。低温和乙醇处理可以减缓蛋白表达速率,但不能减少包涵体蛋白的产生。细菌的冻融处理可以增加包涵体蛋白的提取纯度与丰度。

关键词: 象草 PpCAD 原核表达 包涵体

For information in English, please click here

Prokaryotic Expression Analysis of A PpCAD Gene from Elephant Grass (Pennisetum purpureum cv. Huanan)

TANG Ran 1   

唐然(1988-),男,博士研究生,主要从事牧草生物技术研究

PENG Xiao-Qun 1    JIANG Yuan 1    ZHANG Xiang-Qian 1    XIE Xin-Ming 1   

解新明(1963-),男,博士,教授,博士生导师,主要从事牧草生物技术及遗传资源研究

  • 1、College of Forestry and Landscape Architecture, South China Agricultural University, Guangzhou 510642

Abstract:Cinnamyl Alcohol Dehydrogenase (CAD), a multifunctional enzyme that catalyzes the last step in lignin monolignol biosynthesis, has significant meanings to plant lignification improvement. In the present study, a prokaryotic expression vector of pGEX-PpCAD was constructed based on the cDNA sequence of PpCAD gene, aiming to investigate the in vitro expression property of PpCAD protein. The E. coli strain BL21 was used as expression host. The results showed that soluble fusion protein GST-PpCAD could be induced under the condition of 0.02 mmol/L IPTG, 28℃ and 60 min, but the expression level was low. The induced fusion protein was about 69 kDa and the PpCAD was about 40 kDa, which was consistent with the prediction. Meanwhile, fusion proteinwould convert to inclusion body with increase of induction time, and it was mostly existed in inclusion body no matter how to optimaze induction conditions. Ethyl alcohol and low temperature treatment would slow down the induction of fusion protein, but had no effect on the inclusion body. Frozen treatment was conductive to the extraction of inclusion bodies.

Keywords: Pennisetum purpureum PpCAD Prokayyotic expression Inclusion body

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唐然,彭小群,江院,等. 华南象草PpCAD基因的原核表达研究[EB/OL]. 北京:中国科技论文在线 [2015-05-06]. http://www.paper.edu.cn/releasepaper/content/201505-60.

No.4640869920261143****

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