喹乙醇时间分辨荧光免疫分析方法的建立

金仁耀; 桑永玉

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喹乙醇时间分辨荧光免疫分析方法的建立

首发时间：2016-05-17

金仁耀 ¹
金仁耀（1981-），男，副研究员，主要从事食品安全快速检测技术研究
桑永玉 ¹

1、浙江工商大学海洋食品研究院

摘要：本研究是在制备抗喹乙醇单克隆抗体的基础上，建立了一种以Eu3+为探针的直接竞争时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）方法。采用金属螯合剂环化二乙烯三胺五醋酸酐（cyDTPA）将Eu3+与OLAmAb偶联，制备铕标抗体。开展TRFIA最佳反应条件的优化实验表明，其包被原最佳浓度为1.0 μg/mL，Eu3+标抗体（Eu3+-OLAmAb）最佳稀释度为1000倍稀释；最佳包被缓冲液为0.05 mol/L，pH为9.6的 CBS；Eu3+-OLA-mAb最佳稀释液为0.01 mol/L，pH为7.0的PBS；OLA标准溶液配制时的最佳有机溶剂为含5%甲醇的PBS。条件优化后进行标准曲线拟合，得到一条S型曲线，其IC10和IC50值分别为0.62 ng/mL 和12.64 ng/mL。对饲料进行添加回收率实验，其回收率处于84.80~114.21%之间，变异系数小于15%。经HPLC验证，TRFIA分析灵敏度高，稳定性良好，应用价值非常高。

关键词：喹乙醇单克隆抗体 TRFIA

For information in English, please click here

Development of an TRFIA method for Olaquindox based on monoclonal antibody

JIN RENYAO ¹
金仁耀（1981-），男，副研究员，主要从事食品安全快速检测技术研究
SANG YONGYU ²

1、Institute of seafood,Zhejiang Gongshang University
2、Institute of seafood,Zhejiang Gongshang Univesrity

Abstract：In this paper，a direct competition TRFIA method based on monoclonal antibody to olaquindox and optimized its reaction system were established. The optimal concentration of coating antigen was 1.0 μg/mL, the optimal dilution of Eu3+-OLAmAb was 1000#, the optimum coating buffer was 0.05 M pH9.6 CBS, the best ionic strength of Eu3+-OLAmAb dilutions was 0.01 M and its optimum pH was 7.0, and the preferred organic solvent was "5% methnol-PBS". Finally we got a sigmoid curve, the detection limit for OLA was 0.62 ng/mL and its IC50 was 12.64 ng/mL. The recoveries from feedstuff, pond were all among 84.80~114.21% when OLA were spiked. The coefficient variation were below 15%. The analytical sensitivity of TRFIA was higher than HPLC, so it has a great application value with its good stability.

Keywords： Olaquindox monoclonal antibody TRFIA

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金仁耀，桑永玉. 喹乙醇时间分辨荧光免疫分析方法的建立[EB/OL]. 北京：中国科技论文在线 [2016-05-17]. https://www.paper.edu.cn/releasepaper/content/201605-452.

No.4687107973747146****

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论文编号	201605-452
论文题目	喹乙醇时间分辨荧光免疫分析方法的建立
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