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论文编号 201804-251
论文题目 基于细胞膜片技术构建组织工程真皮:骨髓间充质干细胞、内皮细胞、成纤维细胞联合培养最适比例的研究
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基于细胞膜片技术构建组织工程真皮:骨髓间充质干细胞、内皮细胞、成纤维细胞联合培养最适比例的研究

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武姗 1

武姗(1991),女,硕士,组织工程皮肤

项桦 1

席大力 2

高瑜 1

李毕超 1

任利玲 1

任利玲(1973),女,教授、硕导,口腔正畸学

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1、 兰州大学口腔医学院,兰州 730000 2、 兰州大学第一医院,兰州 730000

摘要:目的:研究骨髓间充质干细胞、脐静脉内皮细胞、真皮成纤维细胞在何种比例下联合培养可以形成组织工程真皮,为未来组织工程真皮的构建提供新思路。方法:HUVECs和HDF的复苏、培养,rBMSCs分离提取,以及共培养构建细胞膜片;1、3、7、14天细胞膜片HE染色以及厚度的测量、CD31免疫荧光染色、Ⅰ型、Ⅲ型胶原的免疫组化染色;第7天细胞膜片中的骨髓间充质干细胞干性的鉴定。结果:原代HUVECs、HDF复苏后形态良好,增殖旺盛;rBMSCs呈均一的长梭形,增殖旺盛;显微镜下观察第7天时成纤维细胞60%和80%组、第14天时40%和60%组细胞排列杂乱,编织成致密的网络状;CD31免疫荧光显示第7天、第14天时成纤维细胞60%、80%组内皮细胞形成的管腔状结构最为典型;免疫组化染色显示在第7天时成纤维细胞60%、80%组最接近人类真皮Ⅰ型胶原的含量,在第1天和第7天时成纤维细胞60%、80%组最接近人类真皮Ⅲ型胶原的含量;流式细胞仪鉴定显示在7天的各组细胞膜片中均有CD90标记的干细胞出现。结论:兔骨髓间充质干细胞、人脐静脉内皮细胞和人真皮成纤维细胞以9:5:21(即成纤维细胞60%组)的比例联合培养形成的细胞膜片在培养第7天时具有真皮的部分属性。

关键词: 联合培养 预血管化 骨髓间充质干细胞 成纤维细胞 内皮细胞 细胞膜片

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