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论文题目 Amuc_1100的表达、纯化及活性探究
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Amuc_1100的表达、纯化及活性探究

首发时间:2019-03-14

梁晓华 1   

梁晓华(1991.10-),女,硕士,蛋白质的表达与纯化

龙光宇 1    孙娇娇 1    刘青青 1   

刘青青(1988.8-),女,助理实验师,分子生物学与动物医学

  • 1、苏州大学剑桥苏大基因组资源中心,苏州 215123

摘要:目的:构建Amuc_1100基因的原核表达载体,以ELP(Elastin-like protein)作为纯化标签与目的蛋白融合表达,并在细胞水平及动物水平上检测重组蛋白的生物学活性。方法:设计并合成重组质粒pET28a-Amuc_1100-ELP,转化入大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中诱导表达,采用ELP特有的可逆相变循环(inverse transition cycling,ITC)特性分离纯化重组蛋白。细胞水平上,提取小鼠的PBMCs细胞检测IL-10的表达水平;动物水平上,灌胃高脂诱导的肥胖小鼠检测该蛋白对小鼠代谢的改善效果。结果:利用大肠杆菌表达系统表达出了与预期分子质量60 kDa相符的重组蛋白,经ITC循环后获得了高纯度的重组蛋白,该蛋白上调了PBMCs细胞IL-10的表达水平,且显著改善了高脂饮食诱导的小鼠肥胖及代谢紊乱。结论:重组蛋白表达质粒pET28a-Amuc_1100-ELP构建成功,经表达、纯化后获得了高纯度且具有生物学活性的重组蛋白。本研究为Amuc_1100的工业化生产及其临床应用奠定了基础。

关键词: 分子生物学 大肠杆菌 重组蛋白 ITC循环 代谢综合征

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Expression, purification and activity study of Amuc_1100

LIANG Xiaohua 1   

梁晓华(1991.10-),女,硕士,蛋白质的表达与纯化

LONG Guangyu 1    SUN Jiaojiao 1    LIU Qingqing 1   

刘青青(1988.8-),女,助理实验师,分子生物学与动物医学

  • 1、Cambridge-Suda(CAM-SU)Genomic Resource Center,Soochow University,Suzhou 215123

Abstract:Objective: In this study, we aimed to construct a prokaryotic expression plasmid of gene Amuc_1100 and employ ELP(elastin-like protein) as a purification tag for fusion expression, and explore its biological activity. Methods: Design and synthesize the recombinant plasmid pET28a-Amuc_1100-ELP and transform into E.coli BL21(DE3), the recombinant protein was purified by the inverse transition cycle characteristic of ELP. In order to detect the biological activity of the recombinant protein, the expression level of interleukin-10 (IL-10) was measured in PBMCs cells from mice, and the effect of the protein on the metabolism of mice was observed by oral administration in HFD-induced mouse model. Results: These results showed that molecular weight of the expressed protein was 60 kDa as expected. The high purity recombinant protein was obtained after inverse transition cycling (ITC). Moreover, the recombinant protein promoted the expression level of IL-10 and improved the HFD-induced metabolic disorders. Conclusion: The prokaryotic recombinant plasmid pET28a-Amuc_1100-ELP was successfully cloned, a high purity and active target protein was obtained after expression and purification. Taken together, our findings provide support for the industrial production and clinical application.

Keywords: Molecular biology Escherichia coli recombinant protein inverse transition cycling metabolic syndrome

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梁晓华,龙光宇,孙娇娇,等. Amuc_1100的表达、纯化及活性探究[EB/OL]. 北京:中国科技论文在线 [2019-03-14]. http://www.paper.edu.cn/releasepaper/content/201903-167.

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