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论文编号 201903-168
论文题目 胰岛素类似物ProINS(7pep)-LE-ELP的表达、纯化与活性初探
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胰岛素类似物ProINS(7pep)-LE-ELP的表达、纯化与活性初探

首发时间:2019-03-14

赵晨红 1   

赵晨红(1992.01-),女,硕士,糖尿病与胰岛素类似物的表达

宫燚 1    刘青青 1   

刘青青(1988.8-),女,助理实验师,分子生物学与动物医学

  • 1、苏州大学剑桥-苏大基因组资源中心,苏州 215123

摘要:目的:构建重组基因的ProINS(7pep)-LE-ELP原核表达载体,通过诱导表达获得ProINS(7pep)-LE-ELP重组蛋白,并检测其生物学活性,为探索新型胰岛素类似物的开发与应用奠定基础。方法:将ProINS(7pep)-LE-ELP基因片段克隆到pET28α-MCS载体上,转化至BL21(DE3)大肠杆菌中诱导表达。运用ELP标签的特性对目的蛋白进行纯化,然后在个体水平检测其生物学活性。结果:在BL21(DE3)中成功表达出分子量约为45 kDa 的目的蛋白,经纯化后,按照135 nmol/kg的剂量注射给患有I型糖尿病的小鼠,小鼠血糖缓慢下降,并维持长时间较低的血糖水平。通过比较注射不同剂量的融合蛋白,发现此蛋白是剂量依赖型的。结论:成功构建了 pET-ProINS(7pep)-LE-ELP表达体系,得到可溶的具有生物学活性的目的蛋白。

关键词: 分子生物学 ProINS(7pep)-LE-ELP融合蛋白 蛋白表达 可逆相变循环 I 型糖尿病

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Study on expression, purification and activity of insulin analog ProINS(7pep)-LE-ELP

ZHAO Chenhong 1   

赵晨红(1992.01-),女,硕士,糖尿病与胰岛素类似物的表达

GONG Yi 1    LIU Qingqing 1   

刘青青(1988.8-),女,助理实验师,分子生物学与动物医学

  • 1、Cambridge-Suda(CAM-SU)Genomic Resource Center,Soochow University,Suzhou 215123

Abstract:Objective: To construct a prokaryotic expression vector bearing fusion gene ProINS(7pep)-LE-ELP, express the fusion gene and study the biological activity of fusion protein, which laid a foundation for exploring the development and application of novel insulin analogues. Methods: The ProINS(7pep)-LE-ELP gene fragment was cloned into pET28α-MCS vector. The resulting plasmid containing ProINS(7pep)-LE-ELP was transformed into the bacterial strain BL21 (DE3) and induced by IPTG. The protein of interest is purified using the characteristics of the ELP tag and then tested for biological activity at the individual level. Results: The target protein with a molecular weight of about 45 kDa was successfully expressed in BL21(DE3). After purification, it was injected into type I diabetic mice at a dose of 135 nmol/kg. The blood glucose of the mice slowly decreased and remained low for a long time. This protein was found to be dose dependent by comparing different doses of the fusion protein. Conclusion: The pET-ProINS(7pep)-LE-ELP expression system was successfully constructed, and the soluble biologically active protein was obtained.

Keywords: Molecular biology ProINS(7pep)-LE-ELP fusion protein protein expression ITC(Inverse Transition Cycling) T1DM(type I diabetes mellitus)

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赵晨红,宫燚,刘青青. 胰岛素类似物ProINS(7pep)-LE-ELP的表达、纯化与活性初探[EB/OL]. 北京:中国科技论文在线 [2019-03-14]. http://www.paper.edu.cn/releasepaper/content/201903-168.

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