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为您找到包含“Enzyme assay”的内容共6

杨金燕,田丽燕,李廷强

2011-12-27

采用一种新的土壤酶检测技术-荧光微孔板酶检测技术,测定土壤硫酸酯酶、磷酸酶、?-葡萄糖苷酶和肽酶活性,采用紫外微孔板酶检测技术测定多酚氧化酶和过氧化物酶活性。结果表明,紫外-荧光微孔板酶检测技术可快速测定土壤中酶的活性。采自农田的昔格达土的硫酸酯酶、磷酸酶和肽酶活性高于紫色土和采自矿山的昔格达土的相应的酶活性;矿山昔格达土的多酚氧化酶和过氧化物酶活性在三者中最高;紫色土的β-葡萄糖苷酶活性高于昔格达土的β-葡萄糖苷酶活性。

教育部高等学校博士点科研基金项目(200806101129

科技部国际合作项目(2011DFA101222

四川大学建筑与环境学院,四川大学建筑与环境学院,浙江大学环境与资源学院

#环境科学技术#

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王瑜,张惠文

2012-03-12

比较两种血浆壳三糖酶底物的测定结果,及其应用于临床肝脾增大患者的辅助诊断效果。方法 收集87例正常人、戈谢病患者及尼曼匹克病A/B型患者的血浆,分别使用底物4-methylumbelliferyl-β-D-N,N',N"-triacetyl-chitotrioside (4MU-C3)和4-Methylumbelliferyl 4-Deoxy-β-D-chitobiose(4MU-4dC2)测定血浆壳三糖酶(Chitotriosidase,CT)活性,并对研究对象进行了壳三糖酶基因24个碱基对重复序列突变(dup24)检测。结果 使用底物4MU-4dC2的测定值比4MU-C3高。dup24纯和突变型对象壳三糖酶缺失;dup24野生突变型及杂合突变型对象中,戈谢病患者血浆CT值显著升高。。结论CT对戈谢病和尼曼匹克病具有辅助诊断价值。使用4MU-4dC2作为检测底物可使戈谢病患者的实验室监测更为敏感。

高等学校博士学科点专项科研基金资助课题(200802481048

上海交通大学医学院附属新华医院;上海市儿科医学研究所,上海交通大学医学院附属新华医院;上海市儿科医学研究所

#临床医学#

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王妹梅,黄骥,张红生

2005-12-22

二氢乳清酸脱氢酶(DHODH,dihydroorotate dehydrogenase, EC1.3.3.1)催化嘧啶从头合成途径中第四步反应,即二氢乳清酸氧化生成乳清酸。本研究利用电子克隆的策略和RT-PCR的方法克隆了水稻二氢乳清酸脱氢酶基因的全长cDNA 序列,命名为OsDHODH2(Oryza sativa dihydroorotate dehydrogenase 2)。该cDNA 序列全长为1632bp,编码469个氨基酸,与拟南芥二氢乳清酸脱氢酶基因氨基酸序列的一致性和相似性分别为81%和89%。构建了OsDHODH2的原核表达载体pET-30a(+)- OsDHODH2,转入大肠杆菌后得到了有效表达并具有酶活性,证明OsDHODH2是编码DHODH的功能基因。半定量RT-PCR表明,OsDHODH2在水稻不同组织中均表达,其中在成株期的根和穗中表达量相对较低;OsDHODH2基因受干旱和高盐胁迫处理的诱导表达,推测OsDHODH2基因可能参与植物的高盐和干旱的胁迫应答反应。

教育部博士点基金(20020307036

南京农业大学,南京农业大学,南京农业大学

#生物学#

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周文婷,崔羽,王晓燕,张永红,李世荣,李景鹏

2006-04-17

І类乙醇脱氢酶(ADH)在乙醇的肝代谢中发挥重要作用,由ADH1、ADH2和ADH3组成。根据序列数据设计一对引物,利用RT-PCR同时克隆乙醇脱氢酶І类基因全长cDNA。测序后的cDNA被克隆在表达载体pTYB11上并在大肠杆菌中稳定表达。纯化获得的酶通过检测其在340nm处吸光值的变化进行酶活性测定。经检测重组ADH1,ADH2和ADH3的酶活力分别为1.8± 0.3U/mg, 0.9±0.2U/mg和1.4±0.2U/mg。

东北农业大学生命科学与生物技术中心,东北农业大学生命科学与生物技术中心,哈尔滨医科大学附属第四医院检验科,东北农业大学生命科学与生物技术中心,东北农业大学生命科学与生物技术中心,东北农业大学生命科学与生物技术中心

#生物学#

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Ma Qianqian,Liu Li,He Jingjing,Miao Yuqing

A rapid and sensitive visual detection of methyl parathion in homogeneous reaction was developed using water soluable poly(vinyl alcohol) (PVA) to immobilize cholinesterase (ChE). When used, a piece of ChE-PVA film is put into the solution and dissolved quickly. The released ChE from enzyme film is mixed and interacted fully with substrates and methyl parathion inhibitors. The color reaction is developed quickly in homogeneous system and the change or diference of color could be observed easily and clearly, while for common colorimetric sticks or strips for pesticides, it is dificult to discern the diference of developed color exactly due to the uneven dying on the surface of supporting matrix. With 10 min of inhibiton and 5 min enzyme reaction, 0.1 ?g/mL concentration of methyl parathion could be observed by visual detection.

2010-10-27

Institute of Physical Chemstry,College of Chemistry and Life Science,Zhejiang Normal University,Jinhua Plant Protection Station,Institute of Physical Chemstry,College of Chemistry and Life Science,Zhejiang Normal University,Institute of Physical Chemstry,College of Chemistry and Life Science,Zhejiang Normal University

#Chemistry#

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李正群,宋妍悦,朱家峰,贾保磊,张世宏

2016-06-30

构建古细菌(Thermococcus kodakarensis)KOD1蛋白酶的重组大肠杆菌菌株、纯化重组酶并明确该酶的酶活特性,为深入分析蛋白酶的结构和特性奠定基础。以嗜热厌氧古细菌KOD1的基因组为模板,PCR扩增TK0512基因,构建其原核表达载体,利用BL21(DE3)表达系统,IPTG诱导表达得到目的蛋白酶,通过镍柱亲和层析对该酶进行纯化。经纯化的酶分别以酪蛋白、BSA及自身为底物,进行一些酶活性质的探究。从古细菌KOD1的基因组DNA中扩增出705bp的目的片段,对该基因进行原核表达并纯化,样品经SDS-PAGE 分析在约28 kDa 附近出现特异性条带。通过对TK0512蛋白酶活性分析发现,TK0512蛋白酶可将酪蛋白、BSA、甚至其本身作为底物进行分解。该酶发挥活性的最适温度是55-60℃,最适pH值是8.0-9.0,其活性对Zn2+有明显依赖性,EDTA对其活性具有抑制作用。蛋白酶TK0512基因编码产物为27.43 kDa蛋白,其活性明显依靠Zn2+,属于金属蛋白酶,在高温(60℃)条件下具有较高活性,是一种嗜热酶,在工业生产上有着很大的应用潜力。

高等学校博士学科点专项科研基金(20120061120103

吉林大学植物科学学院,长春 130000,吉林大学植物科学学院,长春 130000,吉林大学植物科学学院,长春 130000,吉林大学植物科学学院,长春 130000,吉林大学植物科学学院,长春 130000

#生物学#

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