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2003-2020 全部
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WANG Xubo,JIANG Jiajun,ZHANG Quanqi

DAZL is an RNA-binding protein of DAZ family, playing key roles in reproduction of organisms. Here in this study, we clone and identify the dazl gene in a kind of flatfish, Japanese flounder (Paralichthys olivaceus). Two different splicing variants of dazl mRNAs are found, and they differ from each other by a 51-bp insertion/deletion. We characterize the two mRNA variants by qPCR and in situ hybridization and prove their germ cell specific expression patterns. Results of western blot and immunohistochemistry show that the two isoforms of their translational production also express specifically in germ cells of both sexes. The similar expression patterns of the two variants may imply their complementary functions in germ cell development. But there are also differences in their functions. By RNA-binding protein immunoprecipitation, we find Podazl-I and Podazl-II may be the target of both PODAZL isoforms. More sequencing results will offer more detailed and accurate information on their functions. Studies on the two dazl variants in Japanese flounder are rare in teleosts. Our results may facilitate further studies on reproduction related genes and germ cell development.

2016-05-23

Doctoral Fund of Ministry of Education of China (No.20120132110010

College of Marine Life Science, Ocean University of China,College of Marine Life Science, Ocean University of China,College of Marine Life Science, Ocean University of China

#Biology#

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李朝晖,田男,魏君,李小玲,杜超,田宇

2013-12-27

目的:比较胶质瘤细胞U87、U251、A172和正常星形胶质细胞HA1800中ADAR2 mRNA前体选择性剪接模式的差别。方法:RT-PCR产物测序检测胶质瘤细胞和正常胶质细胞中Glu2 Q/R位点的A-to-I编辑水平。根据前期研究鉴定出的选择性剪接位点设计特异性引物,Real-time PCR方法检测胶质瘤细胞U87、U251、A172和正常星形胶质细胞HA1800中不同剪接转录本的相对表达量,比较胶质瘤细胞和正常胶质细胞中ADAR2 mRNA前体剪接模式的差异。结果:胶质瘤细胞中Glu2 Q/R位点的A-to-I编辑水平明显下降。Real-time PCR检测到在胶质瘤细胞中,Exon 5a(+)/5a(-)的比值明显高于正常星形胶质细胞HA1800。Exon 1a(+)/1a(-)、Exon 2(+)/2(-)的比值在胶质瘤细胞和正常星形胶质细胞中无差异。结论:Exon 5a位点的剪接在胶质瘤细胞和正常细胞中存在明显差别,Exon 5a(+)转录本的表达增加可能是导致胶质瘤细胞中ADAR2编辑活性下降的原因。

国家自然科学基金资助项目(30672159

吉林大学中日联谊医院神经外二科,浙江中医药大学生命科学学院,吉林大学中日联谊医院神经外二科,浙江中医药大学生命科学学院,吉林大学中日联谊医院神经外二科,吉林大学中日联谊医院神经外二科

#临床医学#

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李朝晖,杜超,田男,李小玲,魏君,田宇

2013-12-27

目的 鉴定胶质瘤细胞U87、U251、A172和正常星形胶质细胞HA1800中ADAR2 mRNA前体的选择性剪接位点,并比较选择性剪接模式在各组细胞中的差异。方法 将ADAR2全长cDNA分成6个连续重叠的片段,利用RT-PCR方法从胶质瘤细胞U87、U251、A172和正常星形胶质细胞HA1800中扩增ADAR2基因。扩增产物进行电泳分析,光密度值测定比较相对表达量。纯化后构建至pGEM-T Easy载体中,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆并进行序列测定。结果 在胶质瘤细胞U87、U251、A172和正常星形胶质细胞HA1800中均检测到ADAR2 mRNA前体有3个剪接位点:第1个剪接位点位于外显子-1和外显子1之间,产生Exon 1a;第2个剪接位点导致Exon 2缺失;第3个剪接位点位于催化活性区域,引起Exon 5a的插入。其中第2个位点的剪接水平在胶质瘤细胞和正常胶质细胞中存在差异。结论 在胶质瘤细胞和正常星形胶质细胞中,检测到ADAR2 mRNA前体有3个相同的剪接位点。胶质瘤细胞和正常星形胶质细胞剪接水平存在差异。ADAR2 mRNA前体的选择性剪接可能参与A-to-I RNA编辑水平的调控。

国家自然科学基金资助项目(30672159

吉林大学中日联谊医院神经外二科,吉林大学中日联谊医院神经外二科,浙江中医药大学生命科学学院,浙江中医药大学生命科学学院,吉林大学中日联谊医院神经外二科,吉林大学中日联谊医院神经外二科

#临床医学#

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