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2003-2017 生物学
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葛红秀,刘波,解纯刚,舒建洪,吴祥甫,张耀洲

2010-01-04

家蚕钙磷蛋白(Bombyx mori calcyphosphine, BmCAPS)是一种钙离子结合蛋白,含有两个EF-hand保守结构域,BmCAPS基因的cDNA序列全长为1038 bp(GenBank登录号为DQ443221),开放阅读框(ORF)为720 bp,编码239个氨基酸残基,预测分子量为26.874 kD。我们将BmCAPS的ORF克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒后转化E.coli BL21 Star(DE3),IPTG 诱导表达并纯化带His标签的融合蛋白,免疫新西兰兔制备多克隆抗体。间接ELISA法测得抗体效价达1:6400以上,Western blotting检测抗体的特异性良好。利用免疫荧光技术对BmCAPS进行亚细胞定位,发现该蛋白仅在细胞质中有分布。同时也利用荧光定量PCR和Western blotting技术分别检测该基因在家蚕不同发育时期和五龄幼虫不同组织器官的转录与表达水平,结果表明,在发育时期中靶mRNA的转录水平由卵到蛾依次升高,这与Western blotting的结果相一致;而在各组织中,精巢中的靶mRNA转录水平和目的蛋白表达水平最高,但在头部、表皮和丝腺中则没有检测到目的蛋白的表达。上述研究将为进一步探讨BmCAPS的功能提供一定的依据。

国家高技术研究与发展计划“863”项目;国家重点基础研究发展计划“973”项目;浙江省自然科学基金项目(2007AA021703;2005CB121006;Y207217

浙江理工大学生物化学研究所,浙江理工大学生物化学研究所,浙江理工大学生物化学研究所,浙江理工大学生物化学研究所,浙江理工大学生物化学研究所,浙江理工大学生物化学研究所

#生物学#

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刘海平,钱其军

2010-01-04

全长抗体基因治疗在肿瘤的治疗有着广泛的应用前景。我们首先构建靶向EGFR抗原的全长抗体Cetuximab(C225)基因的穿梭载体后,与5型腺病毒骨架质粒pBHGE3重组得到重组腺病毒。利用密码子的偏爱性修改部分抗体基因密码子以提高抗体表达,构建得到新的重组腺病毒。用ELISA法检测抗体的表达量、Western和IFA检测全长抗体的完整性和特异性。结果显示腺病毒载体表达的抗体与商品化Cetuximab抗体相近是完整的和有活性的,通过修改氨基酸密码子提高了抗体的表达量。

国家自然科学基金(30672402

浙江理工大学生命科学学院,1浙江理工大学生命科学学院 2第二军医大学东方肝胆外科医院

#生物学#

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李书祥,黎晨,袁利玲,李娜,袁永泽,杨江科,闫云君,刘德立

2010-01-05

本文通过构建重组质粒pET28-p450nor2,成功表达了重组真菌细胞色素P450nor2蛋白。经优化表达条件、提高重组蛋白可溶性大量表达后,采用Ni+-NTA亲和层析分离纯化得到重组蛋白pET-p450nor2。基于细胞色素P450nor2与同源蛋白P450nor1氨基酸序列的相似性,采用Tripos sybyl软件对细胞色素P450nor2进行了同源模建和分子叠合,获得了理想的同源模建结果。经分子动力学优化后,对构建的P450nor2蛋白模型进行了模型评价分析。确定模型合理性后,运用FlexX程序对其进行了分子对接和功能分析。这将为进一步研究靶酶小分子奠定理论基础。

教育部博士点基金(20060511002

国家自然科学基金(30771429

国家科技部“863”项目(2007AA05Z417

湖北省科技攻关项目(2007AA301C26

华中师范大学生命科学学院,遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室,华中师范大学生命科学学院,遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室,华中师范大学生命科学学院,遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室,华中师范大学生命科学学院,遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室,华中师范大学生命科学学院,遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室,华中科技大学生命科学与技术学院,华中科技大学生命科学与技术学院,华中师范大学生命科学学院,遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室

#生物学#

本文收录在《中国科技论文在线精品论文》,2010,3(7):665-669

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杨俊忠,倪砚,许尚营,徐可瀚,刘义,曾丽霞,刘德立

2010-01-05

利用富集培养的方法从南昌市郊某养鱼塘采样分离出22株反硝化细菌,其中8株反硝化率较高,从中选择一株效果最好的作为研究对象,命名为HS-N62。该菌在12h将培养基SC 中起始浓度为140 mg/L的硝酸盐氮(NO3-N,10mmol/L)完全降解,并且没有NO2-的积累。对其生长特性进行了研究,最适生长温度的范围是30℃-37℃,最适生长的pH 值范围是6. 0~8. 0,最适C/N比为10:1,并能利用多种碳源生长。运用正交试验探讨了该菌株最适的反硝化条件。通过菌株形态观察、生理生化及16S rDNA 分子鉴定,菌株HS-N62与Pseudomonas sp.亲缘关系最为接近,同源性达99 %,初步鉴定该菌为Pseudomonas sp.。

教育部博士点基金项目(20060511002

湖北省科技攻关计划项目(2007AA201C50

湖北省科技攻关计划项目(2007AA301C26

华中师范大学生命科学学院,湖北省遗传调控与整合生物学重点实验室,华中师范大学生命科学学院,湖北省遗传调控与整合生物学重点实验室,华中师范大学生命科学学院,湖北省遗传调控与整合生物学重点实验室,华中师范大学生命科学学院,湖北省遗传调控与整合生物学重点实验室,华中师范大学生命科学学院,湖北省遗传调控与整合生物学重点实验室,华中师范大学生命科学学院,湖北省遗传调控与整合生物学重点实验室,华中师范大学生命科学学院,湖北省遗传调控与整合生物学重点实验室

#生物学#

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王斌世,张荣

2010-01-06

08-09年通过利用当地常见的10种杂草种植于不同处理的农田,研究半干旱区农田杂草群落结构以及10种杂草群落组分种对环境因子的响应,结果表明: 1.环境因子对农田杂草群落结构的影响按大小排序:气候因子>杂草种植效应>作物密度效应 2.同一物种在不同的气候环境下,可以表现出不同的生活史策略.蝇虫实、田旋花和野荞麦08年生活史策略分别趋向于C对策、S对策和中间型(C-S)对策,而09年生活史策略分别趋向于S对策、CS对策和S对策 3灰绿蔾、狗尾草和短花针茅08生活史策略均趋向于R对策,而09年R对策趋向不明显;紫花香薷、白花点地梅和二裂委陵菜两年的生活史策略和猪毛菜08年生活史策略趋向均不明显, 09年猪毛菜生活史策略趋向于S对策 4.生活史策略随占支配地位的环境因子的变动而作出调整,即生活史特性响应不同环境的生态属性,引起植物的功能性在Grime模型C-R-S轴上的迁移。08-09年的年际变化中(气候因素占支配地位)野荞麦生活史策略趋向于中间型(S-R)对策,田旋花趋向于中间型(C-S)对策.

兰州大学干旱与草地生态教育部重点实验室,兰州大学干旱与草地生态教育部重点实验室

#生物学#

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郑小刚,刘梦雪,周淑荣

2010-01-07

近交衰退指近交个体的适合度相对下降的现象,它是近亲繁殖的主要障碍。研究表明近交衰退的主要原因是近交增加纯和体中隐性有害等位基因的表达几率,自然选择会清除有害等位基因,所以相对于随机交配物种,近交物种具有较低的近交衰退。基因组倍性(多倍体)同样是影响近交衰退水平的重要因素,研究表明多倍体的近交衰退低于其祖先二倍体。本文研究了同源四倍体和异源四倍体适合度及近交衰退随世代的变化,结果显示,不论采取什么繁殖方式,亲代和子一代中同源四倍体的适合度都小于异源四倍体适合度,亲代和子一代中同源四倍体近交衰退都小于异源四倍体;同源四倍体中,亲代和子一代的适合度及近交衰退相等,异源四倍体中亲代近交衰退大于子一代。等位基因的显性水平与自然选择的程度对四倍体适合度与近交衰退的影响比交配系统更大。

兰州大学,兰州大学,兰州大学

#生物学#

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潘艳芳,陈小荣,武美娜,祁金顺

2010-01-07

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的主要病理学特征是脑内出现大量的淀粉样β蛋白(Amyloid β-protein, Aβ),而脑组织和血液中的精氨酸加压素(arginine-vasopressin,AVP)水平却明显下降。但AVP的下降是否参与了Aβ引起的空间认知功能损害、AVP是否能够保护空间认知功能免受Aβ的伤害,目前尚不清楚。本实验利用Morris水迷宫行为学测试手段研究了精氨酸加压素对抗淀粉样β蛋白所致大鼠空间学习、记忆功能伤害的神经保护作用。结果表明:(1)脑室注射Aβ25-35 (25 nmol)显著降低了大鼠的空间学习和记忆能力,寻找水下平台的潜伏期较对照组显著延长,撤除平台后目标象限游泳时间和距离明显减少;(2)给予低剂量(0.1nmol/5ul)的AVP后,学习、记忆功能轻度提高,但与对照组比较,无统计学差异(P>0.05);中等剂量(1nmol/5ul)和高剂量(10nmol/5ul)的AVP使大鼠空间学习和记忆能力均明显增强P<0.01);(3)联合给予AVP和Aβ25-35后,在0.1nmol组,AVP对Aβ25-35的行为学伤害未显示出明显的改善(P>0.05),但1nmol和10nmol的 AVP预处理有效逆转了Aβ25-35所致大鼠空间学习、记忆功能伤害;(4)各处理组大鼠的运动功能和视力均未受到所给药物的影响。这些结果表明脑室注射Aβ25-35能够明显伤害大鼠空间学习和记忆功能;中枢给予AVP(1nmol和10nmol)预处理能够在一定程度上提高大鼠空间学习和记忆能力,并且能剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的大鼠空间学习记忆功能的下降。因此,本实验结果提示,Aβ损害学习和记忆功能可能与AVP功能活动下降有关,中枢AVP系统活动的上调可能在AD的预防和治疗中具有一定的积极作用。

山西医科大学生理学系 细胞生理学省部共建教育部重点实验室,山西医科大学生理学系 细胞生理学省部共建教育部重点实验室,山西医科大学生理学系 细胞生理学省部共建教育部重点实验室,山西医科大学生理学系 细胞生理学省部共建教育部重点实验室

#生物学#

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徐孟昂,张丽杰,张云鹏,李霞

2010-01-07

转录因子组合调控机制对基因功能研究是功能基因组学中十分有意义的工作,DNA基因芯片检测技术可同时检测成千上万个基因表达量,为在基因组层面研究转录因子组合调控与其基因表达一致性研究提供可能。在本文中,我们提出一种新的信息学方法,该方法可识别转录因子三元组与其靶基因,并给出转录因子组合调控与基因表达一致性关联测度。同时,我们将该方法应用于啤酒酵母转录调控研究中,发现47个转录因子三元组,并且高频出现,与其目标基因表达有高度的一致性。

国家自然基金(30571034,30570424

国家863项目,黑龙江科技攻关,国家博士点基金( 30600367

哈尔滨工业大学计算机科学技术学院,哈尔滨工业大学计算机科学与技术学院,哈尔滨工业大学计算机科学与技术学院,哈尔滨工业大学计算机科学与技术学院

#生物学#

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孙婷婷,高晓莲

2010-01-07

荧光蛋白是一类起初存在于水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。它是由11个β片层和1个包含发色基团的α螺旋构成的桶状结构,其只需O2的作用便可自身发光,而不需要借助其他任何外界因素。荧光蛋白性质稳定,在异源生物中表达无细胞毒性或者毒性很小,且因其片段较小(约700 bp左右)易于和其他蛋白融合。融合后的荧光蛋白仍能保持荧光激发活性,所以其作为信标分子而在细胞学、医学和分子生物学领域中得到了广泛的应用。然而,随着荧光蛋白应用领域的扩展对荧光蛋白的种类也提出了更多的要求。而传统的获得荧光蛋白的方式主要局限于从生物体内直接提取或通过定点诱变和突变技术,利用基因合成的方法获得新型荧光蛋白的研究则很少。 本文基于微流体芯片合成获得新型荧光蛋白的基础上,构建真核质粒载体pcDNA3.1(+)-G2-hexaHis,通过转染进入HeLa细胞进行表达,结果显示G2在真核细胞中可以大量表达,且荧光强度很强,亚细胞定位结果显示荧光蛋白G2绝大部分存在于细胞质中,极少部分分布在细胞核中,故荧光蛋白G2可以成为真核细胞中蛋白定位、细胞骨架标记和细胞分裂、胞质蛋白表达强度等领域应用中很有潜力的工具。

浙江理工大学生物工程所,浙江理工大学 生物工程所;休斯顿大学 生物学与生物化学研究所

#生物学#

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李恩书,彭新荣,刘韬,钱其军

2010-01-08

目的:在无血清条件下培养KES小鼠胚胎干细胞,研究LIF在无血清条件下对小鼠胚胎干细胞增殖及多能性维持的影响。方法:联合使用小分子物质SU5402、PD184352和CHIR99021或单独使用LIF培养小鼠胚胎干细胞,检测无血清条件下LIF对小鼠胚胎干细胞自我更新能力和全能性的影响。结合使用极限稀释法培养KES细胞单克隆,统计不同培养体系下单克隆的形成率。结果:无血清条件下,单独使用LIF,不能维持小鼠胚胎干细胞的自我更新能力和全能性;使用含有三种小分子药物 SU5402, PD184352和CHIR99021(3i)的无血清培养液可以维持小鼠胚胎干细胞的自我更新,传代60代以上仍可保持全能性;添加LIF的3i培养系统显著提高了小鼠胚胎干细胞的单克隆形成率。结论:在无血清条件下,LIF不能单独维持小鼠胚胎干细胞的多能性。3i培养系统可以维持胚胎干细胞的全能性而不需要LIF。3i条件下,LIF可以显著促进胚胎干细胞体外增殖和单克隆形成。

国家自然科学基金海外杰出青年项目资助(30728028

浙江理工大学新元医学与生物技术研究所,第二军医大学东方肝胆外科医院病毒-基因治疗实验室,第二军医大学东方肝胆外科医院病毒-基因治疗实验室,浙江理工大学新元医学与生物技术研究所

#生物学#

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