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2003-2020 全部
为您找到包含“江南大学自主科研重点项目”的内容共2

陈思,陈海琴,杨芹,顾震南,陈永泉,张灏,陈卫

2014-03-26

无细胞蛋白质合成系统具有快速、方便等特点,且能表达对活细胞具有一定毒性的膜蛋白和抗菌肽,近年来被广泛应用。本文选取来自产油丝状真菌高山被孢霉多不饱和脂肪酸合成途径中的关键膜结合酶,ω3脂肪酸脱饱和酶基因为研究对象,构建了适宜于体外表达ω3脂肪酸脱饱和酶基因的表达载体pIVEX WG1.4-FADS15,并利用麦胚无细胞蛋白质合成系统实现了高效表达。同时在麦胚无细胞蛋白质合成过程中添加脂质体,以使表达的膜蛋白正确定位至脂质体磷脂双分子层,便于目标蛋白质的正确折叠。研究结果显示,添加脂质体条件下目标蛋白质的表达量达1.8 mg/mL,经碘海醇(Accudenz)密度梯度离心纯化,目标蛋白质纯度可达到90%以上,这为后续对该酶进行催化特性研究和蛋白质晶体结构解析奠定了基础。

国家自然科学基金(21276108

江南大学自主科研重点项目(31271812

江南大学食品学院,无锡 214122,江南大学食品学院,无锡 214122;江南大学食品科学与技术国家重点实验室,无锡 214122,江南大学食品学院,无锡 214122,江南大学食品学院,无锡 214122,江南大学食品学院,无锡 214122;江南大学食品科学与技术国家重点实验室,无锡 214122,江南大学食品学院,无锡 214122,江南大学食品学院,无锡 214122

#生物学#

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吕祥,朱彩林,王南,夏小乐,吴剑荣

2020-01-23

米黑根毛霉脂肪酶(Rhizomucor miehei lipase)在工业领域具有重要的研究价值,利用蛋白质工程技术提高其热稳定性以拓宽应用范围是许多学者关注重点之一。本文在6个压力梯度 (1Bar, 100Bar, 500Bar, 1000Bar, 2000Bar, 4000Bar) 下分别进行分子动力学模拟,并从模拟轨迹中选取4个具有代表性的构象用以空腔识别与计算。选择构成空腔的合适氨基酸进行虚拟饱和突变,通过FoldX suite 5.0和Rosetta 3.10进行自由能计算,筛选了5个潜在有效突变体:Y20F,T21V,S24A,T149I和T198V。基于分子动力学模拟技术,从原子水平分析突变对结构的影响,并通过基因工程技术,引入突变,诱导表达后进行实验验证。结果显示5个突变体中,T21V和T149I稳定性均提高50%,T198V稳定性提高40%,S24A与Y20F稳定性均降低。本研究揭示了以高压为研究方法来选择构成空腔的目标氨基酸,并以自由能为筛选准则来选择合适的突变体,为提高蛋白质的稳定性提供了一种可行的策略。

国家轻工技术与工程一流学科自主课题(2018-14

江南大学自主科研重点项目(JUSRP51734B

江苏省自然科学基金面上项目(BK20161129

Key laboratory of industrial biotechnology, ministry of education, wuxi 214122, China;School of biological engineering, jiangnan university, wuxi 214122, China,Key laboratory of industrial biotechnology, ministry of education, wuxi 214122, China;School of biological engineering, jiangnan university, wuxi 214122, China,Key laboratory of industrial biotechnology, ministry of education, wuxi 214122, China;School of biological engineering, jiangnan university, wuxi 214122, China,Key laboratory of industrial biotechnology, ministry of education, wuxi 214122, China;School of biological engineering, jiangnan university, wuxi 214122, China,Key laboratory of industrial biotechnology, ministry of education, wuxi 214122, China;School of biological engineering, jiangnan university, wuxi 214122, China

#生物学#

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