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程克棣
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期刊论文
中国红豆杉紫杉烯合酶cDNA的分离、表达和鉴定
Acta Botauica Siuica 2002, 44 (2): 181-187，-0001，（）：
紫杉烯合酶是一种二萜环化酶，催化□牛儿基□牛儿基焦磷酸形成紫杉醇生物合成过程中的中司体紫杉烯。利用PCR扩增同源探针筛选cDNA文库，克隆了一个编码中国红豆杉（Taxus Chinensis （Pilg.）REHD）紫杉烯合酶3'端的2151bp的cDNA片段，也通过PCR扩增得到了该基因5'端的611 bP的cDNA片段，将这两个cDNA片段拼接在一起，得到长2712bD的cDNA片段，具有一个2586个碱基的开放词读框架（ORF），编码包括质体转移肽在内的共862个氨基酸残基；该酶与太平洋红豆杉紫杉烯合酶有97%的同源性（indentify），与其他植物萜类环化酶也有较高的同源性。利用融合表达载体pEr-32a在大肠杆菌BL21trxB中表达，所表达的融合蛋白以包含体形式存在。包含体经过变性、复性和再折叠，利用His残基亲和凝胶柱层析得到融合的紫杉烯合酶。用毛细管气相色谱一质谱联用对酶促反应产物进行分析，结果表明，融合的紫杉烯合酶能催化产生4（5），11（12）-紫杉烯。
【免责声明】以下全部内容由[程克棣]上传于[2005年03月31日 22时46分10秒]，版权归原创者所有。本文仅代表作者本人观点，与本网站无关。本网站对文中陈述、观点判断保持中立，不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考，并请自行承担全部责任。
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