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陈旻湖

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期刊论文

减毒鼠伤寒沙门氏菌全长hpaA基因工程菌的构建*

陈旻湖朱森林陈洁胡品津李国庆

微生物学报,2002,42(1):27~32,-0001,():

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摘要/描述

为构建表达HpaA蛋白的重组成减毒鼠伤寒沙门氏菌,并探讨以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体构建H pylori疫苗株的意义,应用PCR法从H pylori基因组DNA中扩增783bp的hpaA基因,经酶切-连接反应将其克隆入原核表达质粒pTre99A的NcoI-Sal I位点,并进行了核苷酸序列测定。重组质粒转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261,提取重组菌质粒,PCR和酶切鉴定,筛选阳性克隆。用SDS-PACE电泳和Western blot进行HpaA表达分析和鉴定,用薄层扫描分析HpaA含量。重组菌C57BL/6小鼠喂滋,分批两d和10d后处死小氧,取脾和未段回肠进行细菌培养,挑菌落提质粒鉴定。结果表明,经PCR和酶切证实,构建了含783bp hpsy基因的重组原核表达质粒,并将后者成功转化了减毒伤寒沙门氏菌。重组菌能表达约30kD HpaA蛋白,重组HpaA量约占全菌体蛋白量的38.9%,Western blot证实其有免疫反应性。小鼠重组菌喂灌两d或10d后,脾和未段回肠均发现携目的基因的菌落。这些结果提示了构建了表达H.Pylori HpaA R重组减毒鼠伤寒沙门氏菌,为制备以减毒伤寒沙门氏菌为抗原释放系统的H. pylori口康活疫苗进行了有益探索。

【免责声明】以下全部内容由[陈旻湖]上传于[2005年03月03日 20时16分19秒],版权归原创者所有。本文仅代表作者本人观点,与本网站无关。本网站对文中陈述、观点判断保持中立,不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考,并请自行承担全部责任。

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