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刘霆
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期刊论文
bcr/abl特异性siRNA真核表达载体的构建及鉴定*
四川大学学报（医学版），2005，36（4）：460～463，-0001，（）：
目的 构建bcr/abl的特异性siRNA真核细胞表达载体,并初步探索对K562细胞bcr/ablmRNA和P210蛋白的影响。方法根据GenBank数据库提供的bcr/abl基因核苷酸序列，按照Tuschl设计原则，选择设计双链小干扰RNA（smallinterfering RNA, siRNA），再转化为能表达其小发卡结构RNA（smallhairpinRNAs, shRNA）的DNA序列，并与pTER质粒定向连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子H1的真核表达载体pTER117、pTER363，经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定;在脂质体的介导下转染K562细胞，用RT-PCR分析bcr/ablmRNA的表达，细胞化学染色检测P210蛋白的表达。结果构建bcr/abl融合基因siRNA真核表达载体pTER117、pTER363，经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致,转染K562细胞24h后，pTER117、pTER363分别使bcr/ablmRNA的相对水平下降52%、43%，使P210蛋白分别下降47%、40%。结论bcr/abl融合基因siRNA真核细胞表达载体构建成功,并有效干扰K562细胞bcr/abl的表达。
【免责声明】以下全部内容由[刘霆]上传于[2009年05月12日 15时22分39秒]，版权归原创者所有。本文仅代表作者本人观点，与本网站无关。本网站对文中陈述、观点判断保持中立，不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考，并请自行承担全部责任。
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