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刘殿武

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期刊论文

肺炎衣原体CPn0308 的基因克隆及其内源性蛋白定位的研究

刘殿武贾天军罗建华张庶民钟光明

卫生研究,2008,37(2):219~222,-0001,():

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摘要/描述

目的 克隆肺炎衣原体基因CPn0308,表达融合蛋白,并制备抗体对其表达的内源性蛋白进行初步定位。方法 根据STD基因库提供的信息设计引物,聚合酶链反应(PCR)克隆目的基因,用BamHI/NotI对克隆的目的基因和pGEX-6P2 载体进行酶切,T4 连接酶连接后,重组质粒经42℃转化XL1-blue 细菌:用PCR进行初步筛选,交叉PCR对提取质粒进一步确定,最后对插入片断进行序列分析:用IPTG诱导阳性克隆的细菌使其表达GST融合蛋白,纯化后免疫小鼠制备抗体,使用IFA 对内源性蛋白进行定位分析。结果 克隆出肺炎衣原体基因CPn0308,全长为366bp,编码121个氨基酸;并表达了融合蛋白GST-CPn0308,分子量约为39kD;制备了抗体,IFA实验发现该蛋白初步定位于肺炎衣原体包涵体膜蛋白上。结论 成功克隆肺炎衣原体基因CPn0308,其内源性蛋白初步定位于肺炎衣原体包涵体膜上。

【免责声明】以下全部内容由[刘殿武]上传于[2010年12月15日 15时33分08秒],版权归原创者所有。本文仅代表作者本人观点,与本网站无关。本网站对文中陈述、观点判断保持中立,不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考,并请自行承担全部责任。

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