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李瑜元

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期刊论文

RNA 干扰对活化的小鼠巨噬细胞TNFα表达的影响

李瑜元谭兵周永健聂玉强杜艳蕾

中华医学杂志2007; 87 (30); 2140,-0001,():

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摘要/描述

目的 观察靶向小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因的小干扰RNA对体外小鼠巨噬细胞系RAW264.7表达TNF-α的抑制作用。方法: 采用化学法合成针对TNF-αmRNA不同位点设计的3条siRNA序列和一条带有荧光标记的BLOCK-ITTM Fluorescent Oligo(修饰的荧光标记的dsRNA)通过脂质体包裹后将其分别转染至小鼠巨噬细胞系RAW264.7,同时设立一个无任何靶基因的siRNA做为阴性对照(siRNA4)。荧光显微镜下观察siRNA的转染效率;用实时荧光定量 PCR和ELISA法分别检测siRNA对TNF-α的mRNA和蛋白表达的抑制作用。结果内毒素刺激后6 h ,巨噬细胞表达TNF-αmRNA 和合成分泌的TNF-α量均增加,于9 ~12 h 达 高峰。利用荧光标记的Oligo观察到siRNA转染效率达72%~80%。siRNA1-4转染巨噬细胞后,与未转染组(TNF-αmRNA 0.2935±0.1470,蛋白2104±32pg/ml)相比,siRNA2、3可见内毒素刺激的TNF-αmRNA(0.1576±0.0308、0.1140±0.0277)和TNF-α蛋白表达[(1355± 348)pg/ml、(817±138)pg/ml]均减少(均P< 0.05),其中siRNA3的抑制率非常显著,达61.2%(P< 0.01)。阴性对照siRNA4对细胞基因及蛋白表达无影响。结论内毒素可刺激小鼠巨噬细胞TNF-α的合成。化学合成siRNA转染小鼠巨噬细胞有较高的转染效率,能有效抑制 TNF-αmRNA及蛋白的表达。

【免责声明】以下全部内容由[李瑜元]上传于[2007年11月20日 15时18分25秒],版权归原创者所有。本文仅代表作者本人观点,与本网站无关。本网站对文中陈述、观点判断保持中立,不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考,并请自行承担全部责任。

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