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王学德

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期刊论文

用根癌农杆菌转化棉花花粉的研究1

王学德李晓王学德*

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摘要/描述

用根癌农杆菌感染棉花花粉的转基因方法,它不仅省略了传统基因转化方法所要求的组织培养过程,而且也不存在诸如花粉管通道法在转化机理上的认识问题。用此法获得的含有外源基因的花粉可与卵细胞自然结合,产生的转化体不存在转化与非转化细胞间的嵌合现象等问题,且转化方法简单,易操作。由于这种感染发生在花粉培养液中,为保证感染过程中花粉不破裂并具有生活力,以及使农杆菌有较高的感染力,培养液必须是适宜的,包括适宜的营养元素和渗透压。研究表明,在含有0.1% H3BO3 、0.3% Ca(NO3)2、0.2% MgSO4•7H2O、0.1% KNO3以及45%蔗糖的培养液中培养的花粉,能够保证有95%以上的花粉不破损且有生活力,且其萌发率平均可达58.5%。转化后的花粉经瞬时GUS检测和转化后花粉破损率表明,在附加有1‰体积比的Tween-20的含有农杆菌的花粉培养液中进行抽真空处理的方法是较有效的转化方法。最后所获得的种子萌发后经卡那霉素筛选、GUS稳定表达检测以及Northern杂交验证最后获得4棵转基因植株。因此无论是从理论上还是实践上都证实了该转化方法是可行的

【免责声明】以下全部内容由[王学德]上传于[2005年07月26日 22时48分09秒],版权归原创者所有。本文仅代表作者本人观点,与本网站无关。本网站对文中陈述、观点判断保持中立,不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考,并请自行承担全部责任。

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