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吴顺华
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期刊论文
应用抵制性消减杂交技术筛选三氧化二砷对肝细胞调节的差异表达基因
世界华人消化杂志2005年7月15日第13卷第13期，-0001，（）：
目的：应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization，SSH)技术构建As2O3处理的人肝癌细胞系HepG2差异表达基因的cDNA消减文库，筛选并克隆As2O3调节相关基因，阐明As2O3对肝细胞调节作用的分子生物学机制。方法：以As2O3处理HepG2细胞，同时以PBS处理的相同细胞系作为对照；24h后制备细胞裂解液，提取mRNA并逆转录为cDNA，经RsaI酶切后，将实验组cDNA分成两组，分别与两种不同的接头衔接，再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性多聚酶链反应（PCR)，将产物与T／A载体连接，构建cDNA消减文库，并转染大肠杆菌J109进行文库扩增，随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果：成功构建三As2O3处理HepG2细胞差异表达基因的cDNA消减文库。文库扩增后得到109个白色克隆，进行菌落PCR分析，均得到200—1000bp插入片段、挑取含有插入片段的36个克隆进行测序，并通过生物信息学分析获得15种已知基因序列和6个未知功能的新基因。结论：应用SSH技术成功构建了As2O3处理HepG2细胞差异表达基因的cDNA消减文库。
【免责声明】以下全部内容由[吴顺华]上传于[2007年11月21日 14时05分01秒]，版权归原创者所有。本文仅代表作者本人观点，与本网站无关。本网站对文中陈述、观点判断保持中立，不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考，并请自行承担全部责任。
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