为了研究遗传密码子对表达调控的影响，利用PCR重叠延伸法，对萝卜抗真茵蛋 白Rs-AFP2基因编码序列区的部分核苷酸进行沉默突变，构建突变体Rs-AFPm。序列分析 表明，PCR产物全长240bp，有一个阅读框，编码的蛋白由29个氨基酸的信号肽和51个氨 基酸的抗真菌蛋白组成。突变体与突变前的Rs-AFP2基因相比，在编码区第3号氨基酸 LyS相差一个碱基（17FG→TTA），第5号氨基酸Gln相差一个碱基（CAG→CAA），第6号稀有密码子Arg相差两个碱基（CAG→CGA）。重新合成引物，将切除信号肽的Rs-AFP2基因 和Rs-AFPm基因与原核表达载体pET-2lb（+）分别重组到大肠杆菌BL21菌株。IPTG诱 导后，二者均得到了表达。软件分析显示，突变前pETAFPo表达产物占全菌蛋白的3％，突 变后pETAFPm的表达产物占全茵蛋白含量的8%；表达蛋白主要以包涵体的形式存在，包涵体经超声波破碎后，蛋白质复性，抑菌结果表明，pETAFPm表达产物的抑菌半径大于 pETAFP2表达产物的抑菌半径。这些都说明改造后的Rs-AFPm基因与Rs-AFP2基因相 比，已有效地提高表达量。