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余新炳
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期刊论文
华支睾吸虫溶血磷脂酶基因的识别、克隆和序列分析*
中国寄生虫病防治杂志，2004，17（2）：96～99，-0001，（）：
目的筛选cDNA文库识别华支睾吸虫新基因，并将所发现的华支睾吸虫溶血磷脂酶（csLysoPLAH）基因编码区克隆到原核表达质粒PGEX-4T-1和真核表达质粒pcDNA3上，为进一步研究其功能奠定基础。方法对华支睾吸虫cDNA文库进行随机筛选并测序，在NCBI和ExPasy网站上进行序列分析，识别华支睾吸虫新基因，并应用Motif-san、NCBIConservedDomainSearch等程序对其进行结构域分析。根据PGEX-4T-1和pcDNA3上的克隆位点及所发现的sLysoPLAHcDNA编码序列设计引物，进行PcR扩增，扩增产物回收纯化后克隆到原核表达载体PGEX-4T-1和真核表达载体pcDNA3上。构建的PGEX-4T-1-csLysoPLAH、pcDNA3-csLysoPLAH重组表达质粒经PcR、双酶切及测序证实。结果发现sLysoPLAH基因，完整阅读框含708个碱基，编码235个氨基酸，理论分子质量为25.2628ku，理论pI为6.03。序列分析表明，csLysoPLAH编码氨基酸序列与其它物种有较高的同源性，csLysoPLAH具有磷脂酶/羧酸酯酶保守功能域和完整的脂酶保守功能域，并含有丝氨酸酯酶特征性的标签肽（即GxsxG）。所构建的重组原核和真核表达质粒经PCR、双酶切及测序证实与目标基因相符。结论发现华支睾吸虫溶血磷脂酶基因，并成功构建原核和真核重组表达质粒。
【免责声明】以下全部内容由[余新炳]上传于[2006年11月01日 23时01分41秒]，版权归原创者所有。本文仅代表作者本人观点，与本网站无关。本网站对文中陈述、观点判断保持中立，不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考，并请自行承担全部责任。
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