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余新炳

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期刊论文

日本血吸虫精氨酸酶基因启动子序列的扩增及序列分析

余新炳李孜*吴忠道

热带医学杂志,2005,5(1):1~40,-0001,():

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摘要/描述

目的获取日本血吸虫(si)精氨酸酶(ARG)新基因的DNA编码序列及其启动子序列。实验验证ARG基因编码序列的完整性。方法以日本血吸虫成虫DNA做模板,PCR扩增ARG基因编码区的DNA序列并测序;根据siARG基因已扩增的DNA序列设计2条巢式引物,用TaKaRaLATaqPCRCloninginritroKit,扩增siARG基因的启动子序列;对已扩增得到的序列进行TATA盒的寻找以分析启动子序列的位置,实验验证我们曾获取的sjARG新基因编码序列的完整性。结果扩增得到长约1OOObpARG基因DNA序列,siARG基因DNA序列内没有内含子,与cDNA序列完全一致。对启动子序列扩增后,得到一略大于250bp的序列,测序后分析发现其中有36bp与ARG基困DNA序列的5'端重叠。因此,将精氨酸酶基因的DNA序列又向前延伸了221bp,与前面得到的序列拼接后得到一条1486bp的总序列,将该序列在NCBI上进行ORF的寻找发现其最长的ORF达1164bp,起始密码子在第156位,终止密码子在第l319位。该起始密码子前32位为TATA盒的位置。因此,确定该SiARG基因全长cDNA编码序列长应为1164bp。结论成功扩增获得了日本血吸虫精氨酸酶基因编码区的DNA序列,其不含有内含子;并扩增得到了该基因的启动子序列,从而获得了siARG基因真正的全长cDNA序列,为进一步的功能鉴定奠定了基础。

【免责声明】以下全部内容由[余新炳]上传于[2006年11月01日 23时03分23秒],版权归原创者所有。本文仅代表作者本人观点,与本网站无关。本网站对文中陈述、观点判断保持中立,不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考,并请自行承担全部责任。

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