目的 以逆转录病毒PLXSN为载体，构建重组逆转录病毒C-末端缺陷的JAK3 c-termdeficient JAK3, JAK3（AC）]载体PLJAK3（AC）, 以BALB/C3T3为靶细胞，转染JAK3（AC）CDNA，检测JAK3（△C）蛋白在真核细胞中的表达情况。为利用JAK3（△C）对白血病进行基因治疗的实验研究打基础。方法 用限制性内切酶法从质粒PcDNA3-JAK3（△C）中分离目的基因片段，连接到逆转录病毒载体PLXSN多克隆位点上构建重组逆转录病毒载体PLJAK3（△C），通过转化感受态细菌扩增并检测DNA序列及限制性内切酶酶切鉴定；用脂质体LIPOFECTAMINE介导法将PLJAK3（△C）转染包装细胞PA317细胞，并用G418筛选抗性细胞克隆，收集病毒；用该病毒感染靶细胞BALB/C3T3，G418筛选抗性克隆并测定病毒滴度；抗性细胞扩增培养，细胞溶解后经免疫沉淀（IP）、Western blotting检测BALB/C3T3细胞中JAK3（△C）的表达情况。结果 ①重组逆转录病毒载体PLJAK3（AC）酶切和DNA测序均表明含有2796 bp的JAK3（AC）基因；②病毒滴度为1.2×10 4CFu/ml；③PLJAK3（△C）转染BALB/C3T3细胞中表达出了JAK3（△C）蛋白，其相对分子质量为10 7×10 3。结论 该研究构建的C-末端缺陷JAK3重组逆转录病毒载体PLJAK3（△C）能有效感染PA31 7包装细胞并产生高滴度病毒，同时该病毒能有效将目的基因片段导入真核细胞中并表达。