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期刊论文
应用酵母双杂交技术筛选白细胞cDNA文库与NS5ATP1结合蛋白基因
世界华人消化杂志,2004,12(4):836~839,-0001,():
目的:用酵母双杂交技术筛选白细胞中与NSA5TP1结合蛋白的编码基因。方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增NS5ATP1基因,连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,增菌后提出质粒,转化入大肠杆菌(DH5a),提出质粒并测序进行生物信息学分析。结果:成功隆出NS5ATP1基因并在酵母细胞中表达,配合后选出在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基及铺有X-a-半乳糖(X-a-gal)的四缺培养基上均能生长并变成蓝色的真阳性菌落10个,其中2个人HLA-B27;2个人亚砷酸盐转移子(arsA);1个人单倍型E22i线粒体;1个人pyrin(MEFV);1个人肌动蛋白素1(cofilin 1);1个人染色体15;1个来自RP11-353N14克隆人的DNA基因,位于染色体17;1个新基因。结论:成功克隆出NS5ATP1的结合蛋白,为进一步研究HCV的作用提供了新线索。
【免责声明】以下全部内容由[张树林]上传于[2005年05月26日 17时33分16秒],版权归原创者所有。本文仅代表作者本人观点,与本网站无关。本网站对文中陈述、观点判断保持中立,不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考,并请自行承担全部责任。
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