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周珮
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期刊论文
重组人载脂蛋白A-Ⅰ在Pichia pastoris中表达
，-0001，（）：
高密度脂蛋白（High-density Lipoprotein， HDL）是血浆中重要的脂蛋白，其主要成分为载脂蛋白AⅠ(Apoliprotein AⅠ， ApoAⅠ为了大量制备该蛋白，首先尝试利用Pichia pastoris表达系统高效表达ApoAⅠ。通过PCR扩增获得天然含人载脂蛋白ApoAⅠ的基因片断，将其插入到P.pastoris分泌型载体pPIC9K上，BglⅡ酶切线性化后电转化P.pastoris GS115，将获得的1000多个转化子依次在含不同G418浓度的YPD平板筛选高抗性转化子，得到的22个高抗性转化子经甲醇诱导，SDS-PAGE检测得到6株高表达菌。然后对其中的高表达菌株AP16的培养及诱导条件进行了优化，结果显示：接种后培养24-28h，转入诱导阶段，培养基pH值在7-7.5，菌体密度OD600=80左右，以1%甲醇诱导96h最有利于ApoAⅠ的表达，表达水平达160mg/L。14L发酵罐结果显示表达水平与摇瓶相当，均高于其它表达系统，为大批量制备奠定了基础。
【免责声明】以下全部内容由[周珮]上传于[2005年01月28日 22时03分27秒]，版权归原创者所有。本文仅代表作者本人观点，与本网站无关。本网站对文中陈述、观点判断保持中立，不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考，并请自行承担全部责任。
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