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朱振宇
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期刊论文
人颗粒酶B基因的克隆、蛋白纯化及表达分析
《现代免疫学》，2004，24（6）：486～489，-0001，（）：
TIL具有抗肿瘤的活性，其中颗粒酶B在杀伤肿瘤细胞的过程中起了最重要的作用。本实验拟扩增GrB全序列，构建GrB的原核表达载体，从而建立其原核表达体系，获得高效表达的重组GrB，纯化蛋白。用淋巴细胞分离液分离肿瘤组织中的淋巴细胞，并抽提RNA，RT2PCR方法获得GrB的全长，并重组到pGEX24T21中，用限制性内切酶酶切和DNA测序法进行鉴定，IPTG诱导pGEX2GrB转化的BL21菌，大量纯化表达产物，并通过SDS2PAGE、Western blot分析表达产物，用MTT法体外检测GrB对Hep2细胞的作用。结果：限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实成功获得GrB基因片段，GrB准确克隆入pGEX24T21，成功的构建pGEX2GrB，经诱导表达出与GST融合的蛋白，经凝血酶酶切后获得与GrB相符的条带，并能与GrB特异性抗体结合。体外实验表明，GrB能抑制Hep2细胞的增殖。成功构建了pGEX2GrB，并成功表达、大量纯化GrB蛋白，其能够抑制Hep2细胞的增殖。
【免责声明】以下全部内容由[朱振宇]上传于[2006年10月27日 22时39分53秒]，版权归原创者所有。本文仅代表作者本人观点，与本网站无关。本网站对文中陈述、观点判断保持中立，不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考，并请自行承担全部责任。
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