刘成海
中医药防治肝纤维化与器官纤维化的应用基础研究
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- 姓名:刘成海
- 目前身份:
- 担任导师情况:
- 学位:
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学术头衔:
博士生导师
- 职称:-
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学科领域:
中西医结合医学
- 研究兴趣:中医药防治肝纤维化与器官纤维化的应用基础研究
刘成海,男,1965, 2月出生,湖北省人。专业为中西医结合临床,研究方向为中西医结合防治慢性肝病。
1986年毕业于湖北中医学院中医系,1989年获得硕士学位,1989-1993于湖北中医学院附属医院工作(主治医师),1996年于上海中医药大学获博士学位,2000-2001年于美国耶鲁大学医学院访问学者暨博士后工作。现任上海中医药大学附属曙光医院上海中医药大学肝病研究所副所长兼实验室主任、研究员、教授、博士生导师。主要兼任中国中西医结合学会消化专业委员会副主任委员、中国中西医结合实验医学专业委员会委员、上海市中西医结合学会器官纤维化专业委员会副主任委员、上海高校中医内科学E-研究院特聘研究员等。
主要从事中医药防治肝纤维化与器官纤维化的应用基础研究。至2006年底共承担课题12项,其中教育部新世纪优秀人才计划等人才基金2项;主要参加课题9项,其中人才基金2项。发表论文与综述121篇(论文91篇),其中第一作者43篇(论文27篇),通讯作者27篇(论文14篇)。中国科技引文库、清华同方数据库与万方数据库收录95篇,共被引用713次(他引572次),其中第一与通讯作者论文36篇,引用326次(他引283次)。SCI-E收录文章12篇(影响因子共计47.8),共被引用100次(他引93次),其中第一作者论文3篇,共被引用49次(他引45次)。获得国家科学技术进步奖二等奖等科技成果奖励7项,获国务院政府特殊津贴等荣誉5项,申请发明专利6项,已获发明专利授权2项。为提高我国防治慢性肝病肝纤维化的应用基础研究水平、推动中西医结合肝病学科发展做出了积极贡献。
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【期刊论文】丹酚酸A对培养的大鼠肝星状细胞增殖与胶原生成的作用
刘成海, LIU Cheng-Hai, LIU Ping, HU Yi-Yang, XU Lie-Ming, WANG Zhen-Nan, LIU Cheng
中国药理学报2000Aug, 21 (8): 721-726,-0001,():
-1年11月30日
目的:研究丹酚酸A对培养的大鼠肝星状细胞增殖与胶原生成的影响。方法:用链酶蛋白酶与胶原酶对肝脏进行原位灌流消化,Nycodenz密度梯度离心分离大鼠肝星状细胞,传一代培养。MTT法与[3H]TdR掺入法测定细胞增殖。丽春红染色、图象分析法半定量细胞胶原沉积量,ELISA法测定细胞培养上清中I型胶原分泌量,检测细胞层总蛋白量校正细胞数。RT-PCR法分析前胶原α2(I)基因的表达。结果:丹酚酸A 100μmol/L引起部分细胞脱壁与死亡,有一定毒性反应。丹酚酸A 0.1-10μmol/L对细胞形态无明显影响。丹酚酸A1-100μmol/L浓度依赖性抑制细胞增殖,降低胶原沉积量与I型胶原分泌量。丹酚酸A1-10μmol/L对前胶原α2(I)mRNA表达均有明显抑制作用。结论:丹酚酸A抑制肝星状细胞增殖与胶原表达,是丹参抗肝纤维化的主要有效成分之一,抑制肝星状细胞活化是其抗肝纤维化的主要作用机制。
丹参, 丹酚酸A, 肝硬化, 细胞分裂, 胶原, 培养的细胞, 基因表达, 大鼠, 肝星状细胞
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【期刊论文】大鼠肝纤维化病理过程中Smads锚着蛋白表达变化
刘成海, 陶艳艳, 崔红燕
中华肝脏病杂志2006年12月第14卷第12期/Chin J Hepatol, December 2006, Vol. 14, No. 12,-0001,():
-1年11月30日
目的 观察肝纤维化病理过程中肝脏Smads锚着蛋白(SARA)的表达变化及其与肝纤维化的关系。方法大鼠每kg体重10μl二甲基亚硝胺腹腔注射,1次/d,每周连续3 d,共4周,复制夫鼠肝纤维化模型。模型大鼠分别设首次造模后l、3 d、l、2、3、4周末,与造模停止后l、2、4周,共9个时间段为观察组。每组5~8只,另设正常大鼠10只为对照组。天狼猩红染色观察肝组织胶原沉积,盐酸水解法测定肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,免疫组织化学染色观察肝组织SARA蛋白表达,Western blot法分析肝组织转化生长因子(TGF)β1、a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)和SARA蛋白的表达,并进行以上指标的相关性分析。结果随二甲基亚硝胺染毒持续,模型大鼠肝脏胶原增生(Hyp含量)与沉积增加,4周末时达到高峰,可见宽大纤维间隔与假小叶;而后随染毒停止,肝脏胶原沉积与纤维间隔有所减轻。模型组4、5、6、8周肝组织Hyp平均含量(μg/g)分别为193.0±39.2 188.5±39.9、174.4±21.2、163.6±31.5,对照组分别为125.6±19.5,f值在3.43~4.9,P值均<0.01。免疫组织化学染色发现,SARA主要表达于正常与纤维化肝脏的肝窦周围间质细胞,随肝纤维化发展SARA阳性染色细胞数量减少;随染毒停止与肝纤维化恢复,SARA渐恢复至正常组水平。Western blot发现,随肝纤维化形成,模型大鼠肝组织TGF β1、a-SMA蛋白表达逐渐增加.而SARA蛋白表达逐渐减少;肝纤维化恢复过程中,SARA渐恢复接近正常水平,TGF β1与a-SMA蛋白表达有所下降。在肝纤维化形成与恢复过程中,SARA蛋白与Hyp含量、TGFβ1与a-SMA表达均呈明显负相关。结论SARA蛋白主要表达于肝脏间质细胞;随大鼠肝纤维化发展,SARA表达减少;SARA蛋白与肝纤维化形成呈负相关关系。
肝纤维化, 转化生长因子β, Smads锚着蛋白
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【期刊论文】MMP-2/9活性与TIMP-1/2蛋白表达在大鼠肺纤维化形成中的变化特点
刘成海, 谭善忠, 张炜, 陆雄, 叶伟成, 蔡贞贞, 刘平
中西医结合学报2006年7月第4卷第4期/Journal of Chinese Integrative Medicine, July 2006, Vol. 4, No. 4,-0001,():
-1年11月30日
目的:观察大鼠肺纤维化形成过程中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2/9的活性及其活性抑制物-基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase,TIMP)-1/2蛋白表达的动态变化,探讨肺纤维化形成过程中细胞外基质(extracellular matrix,ECM)降解的调控规律。方法:SD大鼠48只,随机分为模型组(30只)与正常对照组(18只)。模型组大鼠予以1次性气管内注射博来霉素诱导肺纤维化模型,正常对照组大鼠于气管内注入等量生理盐水。每组再各设1 d、3 d和1、2、3、4周共6个时间观察点,动态观察大鼠肺系数的变化。HE染色观察大鼠肺组织病理学的改变;Masson染色观察大鼠肺组织胶原沉积情况;Jamall氏法测定肺组织羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)的含量;Western印迹法分析肺组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2蛋白的表达变化;明胶酶图法检测肺组织MMP-2与MMP-9的活性。结果:与正常对照组大鼠比较,模型组大鼠染毒后2周其肺组织发生局灶性病交,肺泡壁与间隔增厚,肺泡腔与间质内有大量炎细胞浸润,伴有少量成纤维细胞;肺系数明显增高;肺组织内Hyp含量稍升高;MMP-2/9蛋白的表达与活性增加,以活化型MMP-2增加更为明显;TIMP-1/2蛋白的表达则逐渐增加。模型组大鼠染毒后3~4周时,肺泡结构遭到破坏,部分肺泡腔塌陷消失,由胶原纤维和成纤维细胞占据,肺泡壁与间隔进一步增厚,形成严重的肺纤维化;肺系数较2周时有所下降,肺组织Hyp含量和TIMP-1/2蛋白的表达明显增加,至染毒后4周时最为明显;MMP-2/9活性较2周时有所下降,尤以活化型MMP-2的活性下降较为明显。结论:博来霉素诱导肺纤维化形成过程中,早期肺组织的病理学变化以肺泡炎症为主,肺组织内MMP-2/9活性增高;后期以纤维化为主,肺组织TIMP-1/2表达明显增加,MMP-2/9活性则有所下降。
博来霉素, 肺泡炎, 肺纤维化, MMP-2, MMP-9, TIMP-1, TIMP-2
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刘成海, 姜哲浩, 崔红燕, 刘成, 刘平, 徐列明, 胡义扬, 袁继丽, 李凤华
中西医结合学报2004年9月第2卷第5期/J Chin Integr Med, Sep., 2004, Vol. 2, No. 5,-0001,():
-1年11月30日
目的:观察扶正化瘀方对大鼠中毒性。肾间质纤维化的作用。方法:Wistar大鼠40只,分为正常组、模型组、扶正化瘀方药物组。采用二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)腹腔注射4周和含汞等重金属的饲料喂饲造模8周,制备大鼠肝纤维化-肾间质纤维化模型。药物组以扶正化瘀方自第5周起灌胃,1次/d,共4周。肾组织HE染色及六胺银(periodic acid-silver metheramine,PASM)染色,观察。肾组织炎症与胶原纤维沉积变化;试剂盒方法检测血清尿素氮与肌酐含量,观察肾功能变化;盐酸水解法测定肾组织羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量,观察胶原生成变化。结果:模型大鼠肾小管上皮细胞浊肿、坏死与脱落,炎性细胞浸润;肾间质增宽,大量胶原沉积;肾小管基底膜增厚,出现皱褶;血清尿素氮与肌酐含量上升,肾组织Hyp含量显著增加。扶正化瘀方药物组明显减轻模型大鼠。肾小管炎症坏死与肾间质胶原沉积,减轻。肾组织Hyp含量,降低异常增高的血清尿素氮与肌酐水平。结论:DMN腹腔注射与汞等重金属饲料口服可造成大鼠肾间质纤维化,扶正化瘀方可明显改善大鼠肾功能,有抗肾间质纤维化的作用。
扶正化瘀方;纤维化, 肾间质;羟脯氨酸;动物, 实验
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【期刊论文】扶正化瘀319方对肝细胞白蛋白生成的拆方配伍作用
刘成海, 王晓玲, 谭英姿, 王臻楠, 刘平
中国中医基础医学杂志2001年7月第4期/Chinese J Basic Med TCM 2001, Vol. 7, No. 4,-0001,():
-1年11月30日
目的:观察扶正化瘀319方促进肝细胞白蛋白生成的机理度其拆方配伍意义。方法:胶原酶灌流法分离大鼠肝细胞,原代培养。将扶正化瘀319方拆分为扶正组、化瘀组、虫草组、丹参组、虫草加丹参组,灌胃大鼠,制备各组药物血清,并作用于培养肝细胞。ELISA法测定培养上清白蛋白含量,并以细胞层总蛋白量校正细胞敷;RT-PCR法检测细胞前白蛋白原mRNA表达量。结果:药物血清对细胞形态无明显影响,对肝细胞白蛋白分泌及其前白蛋白原mRNA袁达均有不同程度的促进作用,其中以扶正化瘀319方全方作用最为显著,而拆方组、扶正组与化瘀组的作用分别优于其中的单味药组-虫草组与丹参组。结论:促进肝细胞白蛋白基因表达及其蛋白合成是扶正化瘀319方升高慢性肝病血清白蛋白水平的主要机理。在促进白蛋白生成作用中,扶正与化瘀药物组合应用较单一治法或药物有综合优势。
肝细胞, 基因表达, 白蛋白, 慢性肝病, 扶正化瘀319方
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刘成海, Chenghai Liu, Marianna D. A. Gaca, E. Scott Swenson, Vincent F. Vellucci, Michael Reiss, Rebecca G. Wells
The Journal of Biological Chemstry Vol. 278, No. 13, Issue of March 28, pp. 11721-11728, 2003,-0001,():
-1年11月30日
Hepatic stellate cells are the primary cell type responsible for matrix deposition in liver fibrosis, undergoing a process of transdifferentiation into fibrogenic myofibroblasts. These cells, which undergo a similar transdifferentiation process when cultured in vitro, are a major target of the profibrogenic agent transforming growth factor-β (TGF-β). We have studied activation of the TGF-β downstream signaling molecules Smads 2, 3, and 4 in hepatic stellate cells (HSC) cultured in vitro for 1, 4, and 7 days, with quiescent, intermediate, and fully transdifferentiated phenotypes, respectively. Total levels of Smad4, common to multiple TGF-β superfamily signaling pathways, do not change as HSC transdifferentiate, and the protein is found in both nucleus and cytoplasm, independent of treatment with TGF-β or the nuclear export inhibitor leptomycin B. TGF-β mediates activation of Smad2 primarily in early cultured cells and that of Smad3 primarily in transdifferentiated cells. The linker protein SARA, which is required for Smad2 signaling, disappears with transdifferentiation. Additionally, day 7 cells demonstrate constitutive phosphorylation and nuclear localization of Smad 2, which is not affected by pretreatment with TGF-β- neutralizing antibodies, a type I TGF-β receptor kinase inhibitor, or activin- neutralizing antibodies. These results demonstrate essential differences between TGF-β-mediated signaling pathways in quiescent and in vitro transdifferentiated hepatic stellate cells.
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【期刊论文】扶正化瘀319方药物血清对肝星状细胞I型胶原及转化生长因子β1表达的影响
刘成海, 王晓玲, 刘平, 刘成, 谭英姿, 顾宏图
中国中西医结合杂志1999年7月第19卷第7期,-0001,():
-1年11月30日
目的:探讨扶正化瘀319方抗肝纤维化的主要作用机理。方法:分离正常大鼠肝星状细胞,并传代培养。用扶正化瘀319方给正常大鼠灌胃,制备药物血清,温育培养细胞。胶原酶消化法测定细胞内外胶原生成率,ELISA法测定培养上清的I型胶原含量,免疫细胞化学染色、图像分析半定量转化生长因子β1(TGFβ1)蛋白表达,RT-PCR法分析I型前胶原、TGFβ1mRNA的表达量。结果:扶正化瘀319方药物血清能明显抑制肝星状细胞的细胞内外胶原生成率,抑制细胞的I型前胶原基因表达及其胶原分泌,抑制肝星状细胞TGFβ1与蛋白表达。结论:扶正化瘀319方能明显抑制肝星状细胞的活化,对肝星状细胞I型前胶原及TGFBβ1mRNA表达的抑制可能是该方抗肝纤维化的主要作用机理。
扶正化瘀319方, 肝纤维化, 肝星状细胞, I型胶原, 转化生长因子β1, 基因表达
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【期刊论文】丹酚酸 B盐对转化生长因子-β1刺激肝星状细胞活化与胞内信号转导的作用
刘成海, 刘平, 胡义扬, 朱大元
中华医学杂志2002年9月25日第82卷第18期/Natl Med J China, September 25, 2002, Vol. 82, No. 18,-0001,():
-1年11月30日
目的 探讨丹酚酸B盐(SA-B)抗肝纤维化的作用机理。方法 分离大 鼠肝星状细胞(HSC),于无包被的塑料培养皿上原代培养1、4、7 d,细胞分别处于静止、中间活化与完全活化3种活化状态。予以100 pmol/L转化生长因子β1(TGF-β1)刺激,观察细胞a-肌动蛋白表达与胶原分泌的变化。选择对TGF-β1刺激最为敏感的中间活化状态HSC为细胞模型,[3H]胸腺嘧啶掺人法观察0.1gmol/L~1 mmol/L SA-B对该细胞增殖的作用,倒置显微镜观察药物对细胞形态的影响;Western 印迹与Northern印迹等方法观察 SA-B对 TGF-β1刺激活化的HSC胞外基质基因与蛋白表达、a-肌动蛋白表达的影响;提取细胞质与细胞核蛋白,Western 印迹方法观察 SA-B对 TGF-β1刺激的HSC Smad2/3蛋白表达、磷酸化与核转位的影响。结果 TGF-β1促进各活化状态 HSC的胶原分泌,促进率分别为128.6%、207.3%与 188.2%,中间活化状态 HSC对 TGF-β1的促胶原分泌最为敏感。除 0.1 mmol/L~1mmol/L SA-B引起部分细胞死亡外,0.1 gmol/L~10/unol/L SA-B对细胞形态无影响,但可浓度依赖性地抑制细胞增殖,细胞内 [ H]胸腺嘧啶掺 人量分别为对照组的76%、60.1%与 47.8%。1 gmol/L~10tmlol/L SA-B明显抑制 TGF-β1刺激的 HSC胶原分泌量 (分别为对照组的 68.6% 与 56.1%),抑制 a-肌动蛋白与纤维蛋白酶原激活物抑制子蛋白表达,下调I型前胶原基因表达。0.1 gmol/L~10 gmol/LSA-B不同程度地抑制Smad2/3的蛋白表达量,明显抑制 Smad2蛋白胞内磷酸化与核转位。结论 SA-B抑制 TGF-β1的 HSC胞内信号转导,从而拮抗 TGF-β1的促 HSC活化,以上作用是 SA-B抗肝纤维化的主要机理。
肝硬化;丹参;受体, 转化生长因子-β;信号传递
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刘成海, 王晓玲, 王臻楠, 刘平, 顾宏图, 胡义扬
中医杂志2000年10月第41卷第10期/JTCM, October, 2000, Vol. 41, No. 10,-0001,():
-1年11月30日
将扶正化瘀方拆分为扶正组、化瘀组、虫草组、丹参组及丹参加虫草组。制备各组含药血清,分离培养大鼠肝垦状细胞,观察含药血清对培养星状细胞增殖活化、I型胶原蛋白及其mRNA表达的影响。复制二甲基亚硝胺大鼠肝纤维化模型。以全方及拆方组治疗,观察模型大鼠肝脏羟脯氮酸(Hyp)含量与腔原沉积的变化。结果各组含药血清均可抑制星状细胞的增殖和活化,其中化癖药效果最明显;各组含药血清均可抑制星状细胞I型胶原 mRNA及其蛋白的生成,以扶正组效果最佳。对DMN模型肝纤维化的治疗中,以全方组降低肝组织 Hyp含量与胶原沉积最为明显,化癖药与扶正药配伍后减轻胶原生成作用增强,全方具有较好的练台效果。说明扶正化瘀方有较好的抑制星状细胞增殖与胶原基因表达作用,是该方抗肝纤维化作用的重要机理。其中扶正药重在抑制胶原生成,化瘀药长于抑制星状细胞增殖,而全方具有综合效果。
中药配伍, 肝/药榴作用, 扶正化瘀方
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【期刊论文】扶正化瘀复方药物血清对大鼠肝贮脂细胞增殖及胶原合成的影响
刘成海, 刘成, 刘平, 徐列明
中国实验方剂学杂志1996年第2卷第2期/Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae 1996, 2 (2),-0001,():
-1年11月30日
采用正常大鼠灌胃给药、分离血清而体外作用培养细胞的血清药理方法,探讨扶正化瘀方对培养大鼠贮脂细胞功能的影响。结果表明该复方血清无明显细胞毒性,抑制细胞增殖及胶原合成,而且该作用与复方的体内给药方式、给药剂量、取血时问、药物血清作用浓度等有一定关系。
扶正化瘀方, 血清药理学, 抗肝纤维化, 贮脂细胞
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