Background: Hepatic stellate cells (HSCs) are a major fibrogenic cell type that contributes to collagen accumulation during chronic liver disease. With increasing interest in developing antifibrotic therapies, there is a need for cell lines that preserve the in vivo phenotype of human HSCs to elucidate pathways of human hepatic fibrosis. We established and characterised two human HSC cell lines termed LX-1 and LX-2, and compared their features with those of primary human stellate cells. Methods and results: LX-1 and LX-2 were generated by either SV40 T antigen immortalisation (LX-1) or spontaneous immortalisation in low serum conditions (LX-2). Both lines express a smooth muscle actin, vimentin, and glial fibrillary acid protein, as visualised by immunocytochemistry. Similar to primary HSCs, both lines express key receptors regulating hepatic fibrosis, including platelet derived growth factor receptor b (bPDGF-R), obese receptor long form (Ob-RL), and discoidin domain receptor 2 (DDR2), and also proteins involved in matrix remodelling; matrix metalloproteinase (MMP)-2, tissue inhibitor of matrix metalloproteinase (TIMP)-2, and MT1-MMP, as determined by western analyses. LX-2 have reduced expression of TIMP-1. LX-2, but not LX-1, proliferate in response to PDGF. Both lines express mRNAs for a1(I) procollagen and HSP47. Transforming growth factor b1 stimulation increased their a1(I) procollagen mRNA expression, as determined by quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction. LX-2, but not LX-1, cells are highly transfectable. Both lines had a retinoid phenotype typical of stellate cells. Microarray analyses showed strong similarity in gene expression between primary HSCs and either LX-1 (98.4%) or LX-2 (98.7%), with expression of multiple neuronal genes. Conclusions: LX-1 and LX-2 human HSC lines provide valuable new tools in the study of liver disease. Both lines retain key features of HSCs. Two unique advantages of LX-2 are their viability in serum free media and high transfectability.

近年来对脂肪肝的中西医结合研究有较大发展,体现在诊断、治疗和实验研究等方面。多为利用西医的诊断方法或造模方法,应用中药复方、单味中药或中药成分治疗,观察疗效和探讨作用机制。由于脂肪肝的病机特点主要为本虚标实,表现为脾气虚弱、肝肾亏损、痰湿内蕴、气滞血瘀,涉及肝、脾、肾三脏。从而有利于我们以中西医结合的观点、“辨证”和“辨病”相结合,采用专方或基本方加减治疗。这种思路也是国内相当一部分研究者的共识,已成为目前国内脂肪肝研究的主流,取得了一些可喜的成果。本研究所研究的健脾活血方能显著改善脂肪肝患者的肝脏B超影像,治疗后的B超积分较治疗前有显著差异,还能减轻和缓解患者的症状,改善和恢复肝功能,降低腰臀围比值和血中甘油三醋、胆固醇的含量,其总有效率显著优于对照组东宝肝泰。实验研究也显示该方能明显减轻CCI 诱导的大鼠肝细胞脂肪变性程度和炎性细胞的浸润,降低血清ALT和AST的活性,减少肝脏甘油三醇的含量和使肝脏的S0D活性恢复到正常水平,总体疗效优于东宝肝泰。进一步的相关研究还是要在中医理论的指导下,结合现代医学对脂肪肝研究的最新发现,研制高效的中药制剂,揭示其作用机制。

运用免疫组化方法检测大鼠肝脏的I、Iv型胶原及板层索(LM)。发现三者在正常大鼠肝窦周围均有少量存在。在经CCl4刺激后造成肝纤维化大鼠的肝脏。第6周造模组肝窦周围1型胶原与正常组相似Ⅳ型胶原明显减少。LM增多:第11周造模组大鼠肝窦周围的I型胶原仍无增多，Ⅳ型胶原进一步减少,LM则比第6周末明显降低。提示肝纤维化时，大鼠肝脏内皮细胞和肝细胞之间大量的功能性基底膜遭受破坏,但因连续性基底膜的形成受到干扰,肝窦毛细血管化程度不根严重。此可能是CC14肝纤维化大鼠有自愈倾向的原因之一。

挑仁提取物抗CCl4 所致大鼠肝纤维化作用明显，其通过促进I、I、Ⅳ、Ⅵ型胶原和解，显著减少了纤维肝内的纤维间隔，使肝组织结构修复。

用桃仁提取物和虫草菌丝治疗6例肝炎后肝硬化，作治疗前后腹腔镜检查和肝活检，观察患者肝脏大体形态、组织和超微结构以及免疫组化的变化。发现经治后活化的贮脂细胞多已转为静止状态：部分病例肝窦周围和肝细胞之间沉寂的Ⅰ、Ⅲ型胶原、FN和LM减少，因而肝内纤维组织减少；肝细胞间隙中沉积的胶原纤维降解，肝窦毛细血管化受到抑制和逆转。从而多数病例肝细胞变性好转，肝脏质地向正常转化,门静脉高压缓解,肠系膜等处血管曲张度减轻，肝脏色泽转红，链状韧带水肿消失，腹水消退。

目的 丹参酚性酸B(简称丹酚酸B)是丹参抗肝纤维化的有效水溶性成分。用丹酚酸B镁盐作用于大鼠传代肝贮脂细胞，观察药物对贮脂细胞增殖,形态和合成细胞外基质功能的影响。方法 用链霉蛋白酶和胶原酶原位灌注大鼠肝脏，11％Metrizamide离心分离贮脂细胞,传一代后加人不同浓度的丹酚酸B培养72h,在最后24h加^PH]胸腺嘧啶核苷共同温育,检测其细胞内的掺入量；传一代细胞爬片后,加入不同浓度的丹酚酸B培养72h，培养片上细胞用PAP法作I,Ⅲ和Ⅳ型胶原及板层素免疫组化显色.结果 除10 mol／L的丹酚酸B对贮脂细胞有细胞毒性作用外,10-5 -10-7mo1／L对[ H】胸腺嘧啶核苷贮脂细胞内的掺入量都有明显的抑制作用,而对细胞的形态无明显影响(P<0.01；P<0.05)；10-6 me1／L药物能明显减少贮脂细胞I、Ⅲ型胶原和板层素阳性细胞数量(P(0.05；P<0.05；P<0.OO1),提示贮脂细胞合成细胞外基质的功能受到抑制。结论 丹酚酸B抗肝纤维化的部分机理在于抑制了活化贮脂细胞增殖,并通过抑制贮脂细胞生成细胞外基质而减少了腔原纤维在肝内的沉积及干扰丁狄氏间隙基底膜的形成而减轻了肝窭毛细胞血管化。

目的 探讨丹参酚酸B(SA-B)抗肝纤维化作用机制。 方法 分离大鼠肝星状细胞(HSC),于无包被塑料培养皿中原代培养7天,继以10-6mmol／L SA-B孵育, 再加10 ng／ml的转化生长因子β1(TGF-β1)或血小板衍生生长因子一BB(PDGF-BB)刺激。 以Western blot法观察SA-B对TGF-β1或PDGF-BB刺激的HSC内ERK蛋白及其磷酸化表达的影响及对TGF-β1或PDGF-BB刺激的HSC表面TGF-β1I型受体(TβRI)、Ⅱ型受体(TβRⅡ)或PDGF受体β(PDGFR一β)表达的影响。结果 sA-B可抑制原代正常培养9天的HSC及TGF-β】刺激的HSC中ERK1／2的磷酸化;对正常培养的HSC和TGF-β】刺激的HSC表面TβR I和TβRⅡ的表达无明显影响。SA-B抑制原代正常培养9天的HSC和经PDGF-BB刺激的HSC中PDGFR-β的表达,但对PDGF-BB刺激的HSC中ERK1／2磷酸化没有明显作用。结论 SA-B抑制TGF一β1诱导的HSC内ERK信号传导通路。这一抑制作用与HSC上TβR的表达无关,也与PDGF-BB在HSC内的ERK信号传导通路无关。SA-B对PDGF-BB在HSC内的信号传导通路的抑制作用在于抑制了HSC上PDGF受体的表达。