目的：探讨血浆EBV/DNA定量分析，在鼻咽癌早期诊断、临床分期、预后判断和监测放疗后转移复发中的临床意义。方法：采用荧光定量PCR方法定量检测经病理确诊为鼻咽癌的120例初治、90例放疗后随诊患者，其中包括60例放疗后持续缓解，30例远处转移和局部复发患者的血浆EBV/DNA含量。结果：初治、远处转移和局部复发的鼻咽癌患者血浆中游离的EBV/DNA检出率分别为96.0％、95.0％和100％，显著高于治疗后持续缓解鼻咽癌患者、健康时照者和非鼻咽癌的肿瘤患者；初治鼻咽癌患者各TNM 分期之间血浆EBV/DNA拷贝教有显著统计学差异，晚期患者(Ⅲ+IV)期血浆EBV/DNA 中位拷贝教显著高于早期患者(I+Ⅱ)期；初治患者治疗后已出现局部和远处转移者，治疗前血浆EBV/DNA 中位数显著高于尚未出现复发转移患者；初治患者治疗前血浆EBV/DNA≥40000 拷贝/ml与<40000拷贝/ml两个水平，患者22个月无复发生存率分别为46.1％和92.9％，有显著统计学差异；放疗后复发、转移鼻咽癌患者血浆EBV/DNA的中位拷贝数显著高于治疗后持续缓解患者。结论：采用荧光定量PCR方法检测鼻咽癌患者血浆中游离的EBV/DNA是一种敏感可靠的方法，对于鼻咽癌早期诊断、鉴别诊断、分期、判断预后、监剃治疗后复发和远处转移具有重要的临床意叉，有可能成为鼻咽癌的血清肿瘤标记物。

背景与目的：在人体液中可以检测到多种与肿瘤转移相关的因子，有文献报道这些因子与肿瘤分期、预后有关。本研究检测鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)患者血清可溶性因子VEGF、CD44s、MMP-3表达水平，探讨其与肿瘤l临床分期和预后的关系。方法：采用双抗体夹心ELISA法对46例无转移NPC患者、20例局部复发和／或器官转移的NPC患者和l8例健康者外周血中VEGF、CD44S、MMP-3水平进行测定。结果：局部复发和／或远处转移的NPC患者血清VEGF平均水平[(791.7±560.5)ng/L]显著高于健康对照组[(424.6±l97.1)ng/L]和无转移NPC 组[(429.0±249.7)ng/L]；而健康组与无转移NPC组患者VEGF平均水平差异无显著性。初治患者中，T4期患者血清VEGF水平显著高于Tl～T3期；初渝NPC患者治疗前血清VEGF≥600ng/L与<600ng/L两组，治疗后2年无复发生存率有显著性差异(37.5％ vs 83.9％)。有转移NPC患者血清MMP-3水平[(28．8±l5.5)μg/L]显著高于健康组[(16.2±l1.1)μg/L]和无转移组[(19.8±l1.6)μg/L]，健康组与无转移组患者MMP-3水平无显著性差异：治疗前血清MMP-3水平≥25μg/L与<25μg/L的初治NPC患者，治疗后2年无事件生存率无显著性差异。NPC患者血清CD44s水平显著高于健康对照组，但有转移与无转移NPC患者之间无显著性差异；治疗前血清CD44s浓度≥600μg/L与<600μg/L的初治NPC患者，治疗后2年无事件生存率无差异。结论：NPC患者血清VEGF≥800ng/L或MMP-3≥30μg/L，提示可能已发生局部复发和／或远处转移；初治无远处转移NPC患者血清VEGF水平与原发病灶进展有关，札清VEGF≥600ng/L预示治疗后2年无病生存率低。

目的：探讨鼻咽癌组织中MMP-9、CD44v6蛋白表达与鼻咽癌侵袭转移和患者预后的关系。方法：采用免疫组化LSAB法检测l00例存档、石蜡包埋鼻咽癌组织中MMP-9、CD44v6蛋白表达，并分析其与各临床指标和患者总生存率之间的关系。结果：鼻咽癌组织中MMP-9蛋白表达阳性率为85.0％(85/1O0)，其中(+)23.0％，(++)53.0％，(+++)9.0％。CD44v6蛋白表达阳性率63.5％(60/96)，其中(+)37.5％，(++)8.3％，(+++)16.7％。MMP-9表达(+++)的鼻咽癌患者总生存率显著低于MMP-9表达(-)、(+)、(++)的患者。CD44v6表达为(-)、(+)、(++)、(+++)的各组鼻咽癌患者之间的总生存率无差异。鼻咽癌组织中MMP-9和CD44v6表达与患者年龄、性别、T分期、N分期及92’分期无关。结论：鼻咽癌组织中MMP-9、CD44v6蛋白表达与患者年龄、性别、颈淋巴结转移无关。MMP-9蛋白表达强阳性提示患者预后差。

[目的] 研究血管内皮生长因子(VEGF)在鼻咽癌中的表达与鼻咽癌患者预后的关系。[方法]通过组织芯片技术与免疫组织化学方法回顾性研究1990～2002年期间200例有临床随访资料的鼻咽癌组织中VEGF蛋白的表达情况，应用卡方检验分析鼻咽癌组织VEGF蛋白表达与临床病理参数之间的关系，并通过生存分析计算鼻咽癌组织内VEGF不同表达组的总生存率。[结果] VEGF在鼻咽癌组织中阳性表达主要位于肿瘤细胞胞浆内。VEGF在鼻咽癌组织中的表达与鼻咽癌患者的TNM 分期、复发及远处转移呈正相关(P<0.05)。VEGF表达阳性及阴性患者5年生存率分别为40.11％和67.75％，两组生存率存在显著性差异(P<0.01)。[结论] VEGF的表达与鼻咽癌患者TNM分期、复发及远处转移呈明显正相关，其高表达提示预后不良

目的 研究肝癌17号和16号染色体特定区域等位基因杂合性丢失(LOH)发生情况，并探讨LOH与肝癌的临床病理和乙型、丙型肝炎病毒感染的关系。方法 用聚合酶链反应、微卫星多态性分析技术检测17号和16号染色体LOH。结果 17号染色体6个位点在至少个位点发生LOH的有31例(82％)，其中D17S520(17p12-13.3)和TP53(17p13.1)位点LOH频率大干50％；17q所选4个位点中，仅D17S795位点LOH频率大于30％(40％)。16号染色体5个位点在至少一个位点发生LOH的有26例(72％)，所选5个位点LOH率均大干50％，其中以D16S413(16q24)位点LOH率最高(71％)。P53基因的LOH与丙型肝炎病毒感染和肿瘤的大小有关；16号染色体LOH与肝癌的临床病理改变和乙型、丙型肝炎病毒感染无明显关系。结论 17号染色体，尤其是p53基固的LOH与肝短的发生有关，肝癌在染色体16q24区LOH率高，提示染色体17p和l6q24区可能存在多个与肝癌发生、发展相关的肿瘤抑制基因。

目的：建立1种检测表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)基因突变的荧光实时定量PCR的新方法，并探讨应用这种方法检测肺癌组织EGFR基因突变的临床应用价值。方法：通过自行设计探针及引物，应用荧光实时定量PCR方法，检测71例女性非小细胞肺癌患者的肺癌组织中EGFR基因的第19号和第21号外显子上的突变情况，并与直接测序法比较。结果：中国女性非小细胞肺癌的病人中EGFR基因的突变率为30％(21/71)；荧光实时定量PCR与直接测序法的特异度符合率是95％(20/21)，敏感度符合率是100％ ，检测时间为直接测序法的1/12，而且结果判读直观。结论：应用荧光实时定量PCR检测肺癌组织中的EGFR基因特定位点的突变是一种快速、可靠的方法，具有较高的临床应用价值。

目的 分析原发性肝细胞癌(HCC)1号染色体短臂(1p)上10个位点等位基因杂台子丢失(LOH)，以期寻找1P上可能存在的与HCC发生有关的肿瘤抑制基因的缺失区域。方法 用聚合酶链反应(PCR)方法分析38倒HCC的1号染色体短臂l0叶、位点微卫星多态性标记的LOH。所有患者均做HBV5项检测和HCV血清抗体的ELISA法检测。结果 在84.2％(32／38倒)的HCC组织中捡出染色体1P片段的LOH，其中1p31区的DIS186，1p35区的D1S482，和lp36区的DIS243，DIS170。DIS160和DIS165等6个位点发生高频率LOH(>40％)。结论 本组HCC染色体1p等位基因丢失区域主要集中在lp31和lp35-lp36区。这两个区域内可能存在多个与HCC发生有关的肿瘤抑制基因。

背景与目的：有研究表明，在肺癌、乳腺癌等肿瘤组织中，肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)与肿瘤的预后呈负相关。然而在胃癌和部分结直肠癌的研究中得出了TAMs与预后呈正相关的结论。本研究旨在探讨TAMs对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)进展和预后的影响。方法：应用免疫组化技术检测60例鼻咽癌组织中TAMs标记物CD68的表达；分别培养正常巨噬细胞、鼻咽癌细胞株CNE-1和CNE-2以及肺癌细胞株95D，将同浓度的3种癌细胞株的上清液加入同量的巨噬细胞中共培养1天，6天及加入LPS活化后继续培养1天，应用ELISA技术检测共培养后TAMs释放的细胞因子TNF-α和IL-10的表达。以与肺癌细胞株95D上清液共培养后的巨噬细胞作为阳性对照；正常巨噬细胞作为阴性对照。结果：鼻咽癌组织中TAMs高密度表达者的3年无瘤生存率(85.7％)明显高于低密度表达者(56.3％)(P=0.017)。与阳性对照组比较，接受鼻咽癌细胞株CNE-1和CNE-2上清液刺激后的TAMs分泌TNF-α较少(73pg/m1,64pg/ml vs．7794pg/ml,P=O.001)，经LPS活化后明显增多(6905pg/ml,6788pg/ml vs.137pg/ml,P=O.001)；分泌IL-1O很少(1pg/ml,1pg/ml vs.94pg/ml,P=O.002)，经LPS活化后升高不明显(87pg/ml,99pg/ml vs.416pg/ml.P=0/O15)，与阴性对照组比较差异无显著性。结论：鼻咽癌组织中TAMs的密度与患者的预后呈正相关；与鼻咽癌细胞上清液共培养后TAMs分泌的细胞因子倾向于杀伤肿瘤细胞，促进机体的抗瘤免疫作用。

通过构建携带细胞色素C氧化酶基因的RNAi慢病毒载体，获得可供转染的滴度，为下一步研究该基因缺陷在真核细胞中的影响提供物质基础。方法：根据线粒体细胞色素C氧化酶设计的两条互补的单链寡核苷酸退火后形成双链，插入到pENTR/U6质粒缺口末端，连接在质粒上生成含RNAi盒的pENTR/U6载体；通过重组作用将pENTR/U6载体的RNAi盒重组到pLenti6/BLOCK-iT-Dest载体上，构建含U6启动子、靶序列和P0lⅢ终止子表达框的MTCOX-I shRNA表达重组体；经脂质体导入293FT细胞，包装成慢病毒，收集病毒上清并检测其滴度。Western blotting检测干扰后细胞内线粒体细胞色素C氧化酶I亚基的表达。结果：将目的序列成功连接到载体上，并经测序分析证实载体构建成功；成功包装成高滴度的慢病毒。Western blotting检测结果证实构建的MTCOX-I shRNA表达重组体可显著抑制线粒体细胞色素C氧化酶I亚基的表达。结论：成功构建了携带细胞色素C氧化酶基因的RNAi慢病毒载体。