目的 研究进行性肌营养不良（Duchenne/Becker muscular dystrophy, DMD/BMD）患者视网膜眼电图（electroretingram, ERG）表型与临床分型以及基因型的关系，进一步探讨不同基因型的DMD患者抗肌营养不良蛋白（dystrophin）及其同源蛋白在视网膜上的表达及功能，揭示DMD出现ERG异常的分子机理。方法 用11对引物对22例临床确诊的DMD/BMD患者作三步多重PCR进行基因缺失分析，并行ERG检查。结果 DMD/BMD患者ERG改变与临床分型及病情严重程度无关，与DMD/BMD的基因型有关，基因中央区缺失型的ERG异常率明显高于基因非缺失型。结论 DMD/BMD的ERG改变与DMD基因突变位点有关，可能DP260转录启动子与视网膜电信号的传导关系最密切。

目的 确立Ducherme型肌营养不良模型鼠（mdx鼠）骨髓移植前的有效放疗剂量，观察不同数量、不同成分的骨髓细胞对受体mdx鼠造血功能的重建和保护作用。方法 用不同数量的体外培养6～8周C57BL/6雄鼠的骨髓细胞、骨髓基质细胞、骨髓悬浮细胞，经鼠尾静脉注射给不同剂量放疗后的mdx鼠，观察受体鼠的存活率及行为学改变。结果 10只mdx鼠移植前3天12GY r射线照射，在移植后7天内全部死亡，且注射细胞数较多者，存活时司相对较长，而8 Gy r射线照射的6只mdx出鼠，移植后30天5例存活，1例死亡。结论 本实验条件下，移植前8 Gy r射线放疗较合理，在有效剂量放疗破坏受体骨髓造血系统后，移植同系鼠的骨髓细胞、基质细胞、悬浮细胞，mdx鼠均能耐受并存活，且以移植细胞数量为1×107个/只鼠为佳。

目的 对中国人面肩肱型肌营养不良症进行基因诊断。方法 用EcoRl以及EcoRl/BlnⅠ消化基因组DNA，0.6%琼脂糖凝胶电泳，P13E11探针进行somthern印迹杂交。结果 患者所得EcoRⅠ+Blnl/P13E11 DNA片段长度在15～33kb之司，而正常对照在4lkb以上。发现两个症状前患者。结论 以P13E11探针通过Southern印迹杂交探测EcoRl/Blnl双酶消化的基因组DNA可对中国人绝大部分面肩肱型肌营养不良症进行基因诊断，并可进行症状前诊断。

目的 了解dystrophin基因第51内含子的序列特点。方法 用步移法测定第51内含子全序列。测序结果用软件进行重复序列、基质附着区（matrix attachment region, MAR）等分析，将全序列剔除重复序列后进行CpG岛、启动子、开放性可读框架（open reading frame, ORF）及未鉴定的低拷贝重复序列分析。结果 第51内含子由38725bp组成，GC含量为36.34%，重复序列占37.53%。重复序列中以L1序列含量最高，占整个内含子的15.38%。在第51内含子发现有4个MAR和1个Topoll位点。在正反链上均发现有预测的ORF，但根据预测的氨基酸序列未在蛋白质库中发现有同源蛋白。结论 在人类进化过程中部分内含子的扩增可能与L1序列的插入有关；并非所有的重复序列均与染色体重排有关；在第51内含子未发现重叠有其他基因结构；该内含子内密集有4个MAR结构，可能与形成缺失有关的染色质结构有关。

为了解Dystrophin基因缺失断裂点和连接片段的序列特点，以分析Dystrophin基因缺失的分子机制，利用巢式反向PCR克隆了1名51号外显子缺失DMD （Duchenne Muscular Dvstrophy, DMD）患者的缺失连接片段，通过测序，确定5'和3'断裂点及连接片段的序列。对5'、3'断裂点和连接片段进行重复序列、TOPOⅠ、TOPOⅡ酶切位点等分析。结果共测得50号内含子1614bp，确定该患者Dystrophin基因的5'断裂点位于THE1（Transposon-like Human Element，THE）内，3'断裂点位于L2序列内。连接片段有3bp的连接同源序列cta，局部无小的缺失、插入和碱基置换。本研究首次在50号内含子内发现一THE1序列，再次发现Dystrophin基因的缺失断裂点位于THE1结构内。反向PcR操作简单、耗时短，可以推扩应用于缺失连接片段的克隆；THE1可能与部分Dystrophin基因的缺失有关；Dystrophin基因缺失大多与同源重组无关，非同源末端连接可能参与了Dystrophin基因缺失的形成。

目的 研究骨髓干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良鼠（dystrophin/utrophin gene double knock-oulmice, dko鼠）的运动功能改善情况，方法 获取4～5周龄C57BL/6鼠的骨髓干细胞，体外培养3d，以1.0×107/只静脉移植到经7Gy r射线预处理的dko鼠（7～8周龄）。8～9周后，检测移植鼠运动功能、肌电图及肌肉组织dystrophin蛋白表达情况。结果骨髓干细胞移植8-9周后，11只dko鼠牵引运动坠落次数为（3.09±2.47）次，与对照组（非移植组）dko鼠（16.78±3.6）次比较，有显著性差异；肌电图指标中，动作电位时限和最大收缩电位波幅分别为（4.99±1.62）ms和（2872±1474.33）+V，与对照组（3.69±0.40）ms和（1210.00±551.00）+V比较，有显著改善；其肌肉组织有7%肌纤维表达了dystrophin蛋白。结论静脉移植同种、同系鼠骨髓细胞后，dko鼠的运动功能、电生理有了显著改善；其部分骨骼肌细胞有缺失蛋白的表达。提示干细胞移植治疗DMD有较理想的前景。

目的 观察骨髓间质干细胞（MSC）穆植治疗Duchenne肌营养不良症（DMD）动物模型dko小鼠后肌组织dvstrophin/utrophin的表达情况。方法 用体外培养纯化的第5代MSC经尾静脉穆植治疗dko小鼠，穆植后5、10、15、20周分别取实验鼠腓肠肌组织做荧光免疫组化检测dvstrophin/utrophin的表达，计算阳性纤维的平均光密度。结果 传3代以上呈集落生长的MSC均一性好，静脉穆植免疫反应低。穆植后5-20周dko小鼠肌膜组织dvstrophin/utrmphin免疫荧光表达强度有随着时间逐渐递增的趋势，穆植15周前后肌膜荧光带光密度有显著性差异（P=0.035）。结论MSC在体内外均具有强大的可塑性，通过血液循环MSC可趋向病变肌组织，并分化为表达dvstrophin/utmphin的肌纤维，干细胞穆植对dko小鼠肌萎缩组织有一定修复作用。

目的 探讨脐带血干细胞移植对假肥大型肌营养不良症（DMD）治疗的可行性。方法 对1例确诊为有家族史的11岁DMD 患儿经HLA配型，在脐血库中寻找到1份有5个位点相合的干细胞，其细胞数为移植治疗用量的2.6倍。采用白消安、环磷酰胺和兔抗胸腺淋巴细胞球蛋白预处理后进行异基因脐带血干细胞移植治疗；术后给予环孢素A、泼尼松龙和骁悉预防移植物抗宿主反应，前列腺素E1 预防肝静脉阻塞综合征，丽科伟预防巨细胞病毒感染，粒细胞刺激因子惠尔血和丙种球蛋白进行对症支持治疗，定期检测血清肌酸激酶（CK）、造血重建、血型转变和PCR-STR。结果 移植后第12天外周血白细胞为0.5×109/L，第14天1.0×109/L，中性粒细胞数为0.6×109/L，第37天停用粒细胞刺激因子，白细胞波动在3.34×109/L～12.2×109/L；第27天血小板>20×109/L，血红蛋白于第24天上升至88g/L，停用红细胞输注。移植后第42天患儿的血型从移植前的A型转变为AB型（移植干细胞为B型）；PCR-STR检测均呈混合嵌入，供者的比例逐渐上升至55%～65%。第38天出现Ⅰ度移植物抗宿主病，CK从6000U/L降至600～2200U/L。移植后第42天的运动功能较移植前有所改善。结论 异基因脐带血干细胞移植后短期内可恢复造血重建并改善患儿的运动功能。