通过对白花蛇舌草注射液（HDI）在体外抑制人白血病细胞株（HL-60、K562）增殖作用的观察，来探讨HDI用于治疗白血病患者的作用机制。以白血病HL-60、K562细胞株为靶细胞，采用MTT法观察不同浓度的HDI对HL-60、K562细胞增殖的影响；流式细胞术观察两细胞内线粒体跨膜电位(ΔΨm)的水平；用激光共聚焦显微镜观察细胞内线粒体的荧光探针5,5'，6,6'四氯1,1'，3,3'四乙基苯并咪唑基羰化青碘（JC-1）以单体形式还是聚集体形式存在。结果表明：低浓度的HDI（1.56ml/L）对HL-60、K562细胞增殖均无明显抑制作用（P>0.05），但当HDI浓度提高至3.12ml/L~25ml/L时，对HL-60细胞则出现明显的增殖抑制作用，且随浓度增加抑制作用增强（P<0.05或P<0.01）；而明显抑制K562细胞增殖，则浓度提高至6.25ml/L，且随浓度增加抑制增强（P<0.05或P<0.01）。通过流式细胞术对JC-1检测发现HDI能降低HL-60、K562细胞内线粒体跨膜电位(ΔΨm)水平，且随浓度增加降低越明显；激光共聚焦显微镜观察发现经药物处理过的凋亡早期细胞内JC-1不能聚集在线粒体的基质中，为单体，细胞则呈绿色较多，而未经药物处理过的活细胞内JC-1聚集在线粒体的基质中形成聚合物（J-aggregates），细胞则呈桔黄色，两细胞经药物处理前后细胞产生的荧光颜色变化来提示药物处理前后细胞内线粒体膜电位的下降。结论：白花蛇舌草注射液在一定浓度下，能够直接抑制HL-60、K562白血病细胞增殖，其作用机制有可能通过降低线粒体跨膜电位，触发细胞凋亡过程，从而抑制细胞增殖。

趋化因子受体CXCR4与其特异性配体CXCL12结合，启动下游信号通路形成CXCR4/CXCL12生物轴，在造血干细胞的归巢、再植及维持正常造血和造血微环境的稳定过程中发挥重要作用。CXCR4/CXCL12轴同时也可促进白血病细胞存活、增殖、转移及耐药，因此与白血病髓内外复发关系密切。CXCR4的表达水平可作为判断白血病患者预后的重要指标之一，同时CXCR4抑制剂与常规化疗药物联合使用是白血病治疗的一个新方向。

目的观察三七总皂甙（PNS）对锌指结构GATA族转录调控蛋白的诱导作用，探讨PNS在造血细胞内的信号传递途径。方法选择恰当浓度的PNS作用于正常人骨髓单个核细胞、HL-60、K562、CHRF-288和Meg-01细胞，2周后提取核蛋白，用GATA-1和GATA-2抗体行Western印迹杂交，检测GATA-1和GATA-2的表达情况。用32P标记的GATA双链寡核苷酸探针行电泳带移动阻滞试验（EMSA）和抗体胶移动实验，检测GATA-DNA复合物及亚型。结果PNS能够促进人骨髓红系、粒系祖细胞增殖。Western印迹杂交显示PNS诱导K562、CHRF-288和Meg-01细胞的GATA-1和GATA-2蛋白表达量增高，分别是未经处理细胞的1.5～2.8倍和2.0～3.1倍;EMSA结果表明PNS诱导三株细胞的GATA-DNA结合复合物条带密度明显增高;HL-60细胞在PNS处理前后均未显示GATA活性。抗体胶移动实验证明PNS诱导的GATA-DNA复合物的主要成分为GATA-1和GATA-2。免疫沉淀显示PNS诱导的GATA-1和GATA-2蛋白均处于磷酸化的功能激活状态。结论PNS可通过诱导GATA-1和GATA-2蛋白合成增加，与相关基因上游调控区的启动子和（或）增强子结合的活性增高，而调控与造血细胞增殖、分化相关基因的表达。

为了进一步研究三七总皂苷（PNS）对转录调控蛋白AP-1家族的主要成员NF-E2、c-jun和c-fos转录因子的诱导作用，探讨PNS在造血细胞内的信号传递途径，选用人粒系HL-60、红系K562、巨核系CHRF-288和Meg-014个细胞株作靶细胞，经PNS刺激处理后提取细胞核蛋白，分别用人抗NF-E2、c-jun和c-fos抗体与核蛋白作Westernblot杂交实验，并用32P标记的具有与NF-E2、c-jun和c-fos转录因子共同结合位点的AP-1双链寡核苷酸探针作电泳带移动阻滞实验（EMSA）。结果表明：①Westernblot显示PNS诱导HL-60，K562，CHRF-288和Meg-014株细胞的NF-E2和c-jun转录因子蛋白水平分别是未经处理细胞的1.5-2.5倍和2.0-3.0倍。诱导的c-fos蛋白在K562，CHRF-288和Meg-013株细胞分别提高2.0-3.0倍，但HL-60细胞的c-fos在PNS处理后无明显变化；②EMSA显示AP-1转录调控蛋白与DNA结合复合物的特异性条带，经PNS诱导后4株细胞的AP-1蛋白与DNA复合物条带密度明显高于未经处理的细胞。结论：PNS在造血细胞内对基因的转录调控涉及到AP-1家族转录因子成员NF-E2、c-jun和c-fos，通过诱导这些转录因子量的增加，与特异性DNA促进子结合的活性增高而调控与细胞增殖分化相关的基因的表达。

目的：探讨三七总皂甙（PNS）对免疫介导性再生障碍性贫血（再障）小鼠模型血细胞生成的作用。方法：采用免疫介导法进行再障造模Balb/c小鼠经60Coγ射线亚致死量照射后，自尾静脉输入DBA/2小鼠的淋巴细胞，随机分成4组，即模型组、PNS治疗高、中和低剂量组（每只3.2、1.6、0.8mg/d），并设正常对照组。腹腔注射给药，模型组和正常对照组注射生理盐水。治疗12后，做血白细胞计数、骨髓病理检查和粒系、红系造血祖细胞（CFU-GM、CFU-E）集落培养。结果：（1）PNS升高白细胞数，与模型组比较，PNS高、中和低剂量组的白细胞数提高率分别为（34.3±2.9）%，（29.2±1.7）%和（14.5±1.6）%（P<0.01或P<0.05）。（2）改善骨髓抑制，骨髓病理检查模型组出现大片空白区，被大量的脂肪组织代替，而PNS治疗组造血组织结构较完整，造血细胞量丰富。（3）促进造血祖细胞增殖，高、中和低剂量PNS对CFU-GM集落提高率分别为（64.4±2.8）%、（67.3±2.4）%和（21.9±1.8）%（均P<0.01）；CFU-E集落的提高率分别为（39.4±3.6）%、（20.7±2.4）%和（12.8±2.6）%（P<0.01或P<0.05）。结论：免疫介导性再障小鼠在骨髓抑制、造血功能低下时，PNS通过促进骨髓粒系、红系造血祖细胞的增殖，改善骨髓造血组织增生，从而促进血细胞的生成。

为了探讨三七皂苷（PNS）对人骨髓CD34+造血干/祖细胞的刺激增殖和诱导分化的作用，用DynalM-450CD34+免疫磁珠阳性选择法获取高纯度的人骨髓CD34+细胞，采用多向祖细胞（CFU-Mix）体外集落培养和流式细胞术检测细胞增殖与分化。结果显示：经免疫磁珠阳性选择，从骨髓细胞收获的CD34+细胞获得率为（1.30±0.74）%，流式细胞术分析纯度达到86%-93%.PNS10mg/L和25mg/L能刺激CD34+细胞增殖，使CFU-Mix集落生成增加，25mg/L的PNS对CFU-Mix产率提高（34.7±16.0）%（P<0.01），是促进造血的最适浓度；PNS25，50和100mg/L时，能诱导CD34+细胞向粒系细胞分化，粒系表面标记CD33+和CD15+的细胞百分比均明显高于无345的对照组，而红系细胞表面标记CD71+和G-A+细胞百分比则无明显变化。结论：345对CD34+造血干/祖细胞不但具有显著的刺激增殖作用，而且能够诱导其向粒系细胞定向分化的效应。

目的：观察人参皂甙（CS）是否具有诱导髓性白血病HL-60细胞株的凋亡作用。方法：取不同浓度的CS处理HL-60细胞，观察CS所致的细胞形态学的变化；流式细胞术分析细胞DNA含量的改变，并进行DNA片段分析（DNALadder）；用AnnexinV-FITC试验法分析细胞凋亡百分率。结果：人参皂甙能够抑制HL-60细胞生长，在一定剂量和时间范围内可引起细胞凋亡。结论：提示人参皂甙能特异性地诱导HL-60细胞凋亡，可为临床应用人参皂甙作为化疗药物的辅助剂治疗白血病提供实验依据。

目的：通过观察人参皂甙（CS）对c-fos、GATA-1转录因子的诱导作用，探讨CS在造血细胞内的作用机理。方法：选用粒系细胞株HL-60、单核细胞株U937、红系细胞株K562和巨核系细胞株Meg-01作靶细胞，MTT法和祖细胞集落培养法观察CS的增殖效应；用WestemBlot来分析核蛋白抗原与c-fos、GATA-1抗体的结合反应。结果：（1）MTT法和祖细胞集落培养法均显示CS/（10μg/ml）能够明显地刺激三系细胞增殖，与对照组比较差异有显著性（P<0.05）。（2）WestemBlot分析表明HL-60、K562和Meg-01细胞经CS处理后核内c-fos转录调控蛋白量分别是未经处理细胞的1.5、2.0和2.5倍，但U937细胞不表达c-fos蛋白。（3）除了U937细胞不表达GATA-1蛋白外，其他细胞株经CS刺激后GATA-1转录调控蛋白量分别是处理前的1.5、2.1和1.3倍。结论：CS能够明显地刺激3种系列的细胞株增殖，并能有效地通过诱导c-fos或GATA-1转录因子而调控造血细胞与增殖或分化有关基因的表达。