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黄爱龙

传染病学（乙型、丙型肝炎的发病机理及基因治疗研究）、临床检验诊断学、生物制药等。

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姓名：黄爱龙
目前身份：
担任导师情况：
学位：
学术头衔：

博士生导师，国家杰出青年科学基金获得者，教育部“新世纪优秀人才支持计划”入选者
职称：-
学科领域：

内科学
研究兴趣：传染病学（乙型、丙型肝炎的发病机理及基因治疗研究）、临床检验诊断学、生物制药等。

个人简介

　黄爱龙，男，1964年5月出生，1985年获四川大学生物化学专业学士学位，1988年获中国科学院成都生物所微生物遗传专业硕士学位，1988年分配至重庆医科大学病毒性肝炎研究所，主要从事病毒性肝炎发病机理及治疗研究。于1993年破格晋升副教授，1997年再次破格晋升教授。期间，1994-1995年在北京大学医学部分子免疫学国家重点实验室作客座访问；1997-1998年在澳大利亚Adelaide大学作访问学者，并于1998年，由霍英东基金和澳大利亚OPRS奖学金资助，在Adelaide大学微生物与免疫学系攻读博士学位，后因工作需要提前回国。1999年任重庆医科大学科研处副处长、病毒性肝炎研究所副所长，2003年任重庆医科大学校长助理，2004年任重庆医科大学副校长。现为国务院政府津贴获得者，国家杰出青年基金（B类）获得者，霍英东青年教师基金获得者，重庆市十大青年五四奖章获得者（2001年），教育部新世纪优秀人才支持计划获得者（2004年），国家自然科学基金委员会学科组评审专家，《中华肝脏病杂志》、《中国医学工程杂志》、《中华医学研究杂志》、《世界感染杂志》等编委，重庆药学会、重庆医药生物技术协会理事。
　　主要研究领域包括：传染病学（乙型、丙型肝炎的发病机理及基因治疗研究）、临床检验诊断学、生物制药等，曾获得国家“十五”863高技术项目、国家杰出青年基金、国家自然科学基金、霍英东青年教师研究基金、国家科委“九.五”地区攻关项目、国家教育部优秀青年教师基金、卫生部优秀青年科技人才专项基金、重庆市科委重点项目以及科技部科技型中小企业创新基金等资助。有关研究成果分别获得1994年四川省科技进步一等奖和1995年国家科技进步三等奖、2002年度重庆市科技进步奖二等奖（第一获奖者）、2002年度重庆市卫生局科技成果一等奖（第一获奖者），已申请专利5项。近年来共发表研究论文80余篇，其中第一作者发表20余篇， SCI收录近10篇。

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2009-11-03

【期刊论文】Structural and functional homology between duck and chicken interferon-gamma

黄爱龙， A. Huanga， C.A. Scougalla， J.W. Lowenthalb， A.R. Jilberta， c， *， I. Kotlarskia

Developmentaland Comparative Immunology 25, 2001: 55～68，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

The Duck interferon gamma (DuIFN-γ) cDNA was cloned from a phytohaemaglutinin-stimulated duck spleen cDNA library screened using a chicken IFN-γ (ChIFN-γ) cDNA probe. The DuIFN-γ cDNA is 1392 nt long and shows 99% and 80% sequence identity with another cloned DuIFN-γ cDNA, and with ChIFN-γ cDNA, respectively. The cDNA contains a 495 bp ORF that encodes a putative 164 amino acid (AA) protein that shares 67% identity with ChIFN-γ, but only 30-35% identity with mammalian IFN-γ. The predicted three-dimensional (3D) structures of DuIFN-γ and ChIFN-γ are similar when analysed by comparative protein modelling. Culture supernatant collected from COS cells transfected with DuIFN-γ cDNA was able to activate nitrite secretion from a chicken macrophage cell line (HD11) in a dose-dependent fashion. This activity could not be neutralised by an anti-ChIFN-γ monoclonal antibody (Mab 85) that was able to neutralise the activity of ChIFN-γ. Recombinant DuIFN-γ (rDuIFN-γ) protein was expressed in E. coli as an N-terminally His-tagged protein and was purified on a nickel anity column. The eluted protein, which was detected as a 018 kDa band with a purity of>90%, was also detected by Western blot using the anti-ChIFN-γ monoclonal antibody (Mab 9.1). The rDuIFN-γ was shown to activate nitrite secretion by HD11 cells in a dose-dependent fashion with a specific activity that was016-fold lower than a rChIFN-γ control. Two rabbit antisera raised against rDuIFN-γ were able to neutralise COS cell-expressed DuIFN-γ activity; one of these also neutralised ChIFN-γ activity. These findings indicate that DuIFN-γ shares structural and functional identity with ChIFN-γ, which is consistent with our previous results which demonstrated cross reactivity with other lymphokines from the two species.©2000 Elsevier Science Ltd. All rights reserved.

Ducks， Chicken， Interferon-gamma， cDNA， HD11 cell line， Recombinant protein

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2009-11-03

【期刊论文】RNA干扰介导对乙型肝炎病毒复制的抑制作用

黄爱龙，唐霓①，张秉强①，闰歌①，蒲丹①，高小玲①， Tong-Chuan He②，黄爱龙①*

科学通报，2004，49（12）：1145～1150，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

构建针对乙型肝炎病毒（HBV）核心区或表面抗原编码区的siRNA表达载体pSI-C和pSI-S，在体外HBV复制细胞模型中观察对HBV复制和表达的影响。将pSI-C，pSI-S与1.3倍HBV真核表达质粒pHBV共转染HepG2细胞，分别在转染后24，48和72 h，观察pSI-C和pSI-S对细胞上清和胞内病毒抗原表达的影响，并用分子杂交方法从病毒复制、转录和翻译水平检测目的基因的表达情况，实验结果表明，pSI-C及pSI-S能明显抑制细胞内HBsAg和HBcAg的合成，呈序列特异性和剂量依赖性的特点，而对照组siRNA无抑制作用。pSI-C比pSI-S抑制作用更强，转染后第2天对HBsAg和HBeAg押制率达高峰，分别为92%和85%。Southern和Northern杂交结果表明，HBV siRNA能降低目的基因转录和病毒复制中间体的表达水平，提示针对乙型肝炎病毒核心区和表面抗原编码区的siRNA能有效抑制HBVRNA分子转录和病毒复制，最终降低病毒抗原表达，这为运用RNAi技术进行HBV基因治疗提供了新的思路。

抗病毒治疗乙型肝炎病毒 RNA干扰病毒复制基因治疗

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2009-11-03

【期刊论文】重组腺病毒IkBaM在裸鼠体内对人肝癌细胞HepG2的凋亡作用

黄爱龙，高小玲，贾丽萍，浦丹，闫歌，卢年芳，唐霓

中华医学杂志，2004，84（24）：2120～2123，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

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2009-11-03

【期刊论文】RNA干扰技术对肝癌细胞内源survlvln基因表达的影响*

黄爱龙，闫歌)，蒲丹)，唐霓)，高小玲)，宋文鑫)，卢年芳)，吴刚)， TONG-CHUAN HE)黄爱龙)**

生物化学与生物物理进展，2004，31（9）：829～832，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

应用RNA干扰技术（RNAi）研究针对凋亡抑制因子survlvln的siRNA抑制肝癌细胞株内源survlvln基因的表达，转染重组质粒pshRNA-survivin至肝癌细胞株SMMC-7721，通过免疫荧光、蛋白质印迹和半定量RT-PCR检测survlvln蛋白表达及mRNA转录水平的变化。结果表明：构建的三种重组质粒pshRNA-survivinl/2/3均能明显抑制survlvln基因的表达；应用免疫荧光检测survlvln基因的表达，转染重组质粒pshRNA-survivin的实验组survlvln荧光强度明显低于转染载体pTZU6+1和pshRNA-GFP对照组；蛋白质印迹结果表明，重组质粒pshRNA-survivin明显抑制survlvln蛋白韵表达，抑制率为62%～78%，通过半定量RT-PCR检测到su rvivln基因mRNA转录明显减少，抑制率为57%～64%。由上述结果可以得出结论：重组质粒pshRNAsurvivlri可明显抑制SMMC-7721细胞内源survivin的表达和mRNA的转录，为survlvln介导的肿瘤基因沉寂疗法提供实验基础。

RNA干扰,，肝癌细胞株,， survIvin基因

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2009-11-03

【期刊论文】shRNA表达载体构建方法的优化

黄爱龙，张秉强，唐霓，黄爱龙*，闫歌，陶鹏， Tong-Chuan He，张君

生物技术通报，2004，6：47～49，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的探讨shRNA表达栽体的构建方法，以加速RNA干扰研究的进程。方法对shRNA表达裁体的构建过程进行分析和监测，并加以优化。结果发现shRNA表达栽体构建的退火过程容易产生障碍，经优化退火缓冲液的NaCl含量后，能明显提高退火效率及shRNA表达载体构建的成功率。结论shRNA表达载体构建的退火过程需加以关注，退火缓冲液中NaCi含量应提高至200mmol/L以上为宜。

RNA干扰夹状RNA(， shRNA)，退火方法

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2009-11-03

【期刊论文】凋亡抑制因子survivin基因的克隆及在真核细胞中的表达

黄爱龙，闫歌，蒲丹，唐霓，张秉强，高小玲，宋文鑫，何通川

重庆医科大学学报，2004，29（3）：266～268，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的：克隆Survivin编码序列并在真核细胞中表达。方法：RT-PCR扩增Survivin编码序列，建立与绿色荧光蛋白（GFP）共表达的融合重组质粒，转染哺乳动物细胞，利用GFP绿色荧光和Western Blot检测Survivin蛋白的表达。结果：RT-PCR扩增出421bp的Survivin编码序列，构建融合重组质粒Pegfp-Cl-Survivin，利用GFP荧光和Western Blot证实Survivin蛋白的表达。结论：成功克隆Survivin基因并在真核细胞中表达。

Survivin，绿色荧光蛋白，真核细胞，表达

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2009-11-03

【期刊论文】应用RNA干扰治疗小鼠急性乙型肝炎病毒感染

黄爱龙，吴莹，唐霓，张秉强，卢年芳

中华医学杂志，2005，85（9）：630～634，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的建立小鼠急性乙型肝炎病毒感染的动物模型，在此基础上观察小干扰RNA（siRNA）对HBV复制和表达的影响。方法通过尾静脉注射1.3倍的HBV真核表达质粒pHBVl.3建立小鼠急性乙型肝炎感染模型，再将其与针对乙型肝炎病毒核心区的siRNA表达载体（pSI-C）共注射，于注射后第6天取血测血清HBsAg（ELISA），做肝组织HBcAg免疫组化，通过RT-PCR检测肝组织HBV C区mRNA转录子的水平。同时设立PBS对照组、无关干扰组与突变干扰组。结果转染后第6天血清HBSAg在pHBVl.3感染组中高表达（A值为4.08～9.04，平均值为5.07±1.07，A值≥2.1为阳性），肝内HBcAg阳性率为5%～10%：pSI-C干扰组HBSAg，HBcAg的表达均受到抑制，血清HBsAg阴性，A值为0.04～1.5，平均值为0.62±0.59，与感染组相比有显著性差异（P<0.01），肝内HBcAg几乎无表达，RT-PCR示肝内HBV C mRNA水平明显降低。而无关干扰pGFP及突变的干扰序列pSI-C mut则无此作用。结论RNAi技术能特异，高效地抑制小鼠体内HBV的复制和表达，提示siRNA作为一种新型抗病毒药物的巨大潜能，而通过水动力法建立的小鼠急性乙型肝炎病毒感染的动物模型，一定程度上解决了长期以来缺乏合适的HBV感染动物模型的问题，为今后进行药物筛选及抗病毒治疗的研究拓展了新的思路。

肝炎病毒,，乙型，模型,，动物，基因疗法， RNA干扰

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2009-11-03

【期刊论文】向下转膜法在乙肝病毒Southern杂交中的应用

黄爱龙，张秉强，吴莹，唐霓，郭进军，黄英，汤华，黄爱龙*

生物技术通报，2005，2：26～28，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的评价向下转膜法在乙肝病毒（HBV） Southern杂交中的应用效果。方法用带有1.3倍HBV基因的真核表达栽体转染HepG2细胞，使其产生瞬时HBV表迭，72小时收集细胞并提取细胞总DNA，琼脂糖凝胶电泳后，以向上和向下两种方式转移在尼龙膜上；用化学发光标记和检测试剂盒将乙肝病毒基因片段标记成探针，再与向上和向下转膜后的尼龙膜进行杂交，判断产生明显HBV杂交条带所需的细胞总DNA量，从而验证向下转膜法在乙肝病毒Southern杂交中的应用效果。结果发现向下转膜后，检测HBV表达所需的细胞总DNA量极少，灵敏度高，0.5μg细胞总DNA电泳后转膜，即可检测出HBV DNA的表达，凝胶中仅有8%的DNA残留；而向上转膜所需的总DNA量大，灵敏度低，25μg的细胞总DNA电泳后转膜，仅能检测出弱的条带。结论向下转膜法是一种较好的转膜方式，适于对乙肝病毒的Southern杂交，值得推广应用。

向下转移乙肝病毒(， HBV)， Southern杂交

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2009-11-03

【期刊论文】Potent and specific inhibition of SARS-COV antigen expression by RNA interference

黄爱龙， TAO Peng， ZHANG Jun， TANG Ni， ZHEANG Bing-qiang， HE Tong-chuan and HUANG Ai-long

ChinMedJ，2005，118（9）：714～719，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

RNA interference

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2009-11-03

【期刊论文】肿瘤特异性Survivin启动子与甲胎蛋白启动子的活性评价与比较

黄爱龙，况舸，唐霓

中华肝脏病杂志，2005，13（6）：440～442，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的研究并比较肿瘤特异性Survivin和甲胎蛋白（AFP）基因启动子在不同肝细胞癌细胞系中的转录活性，为肝癌靶向性基因治疗提供依据。方法采用聚合酶链反应法扩增获得Survivin和AFP基因的启动子片段，并克隆入表达虫荧光素酶基因的报告质粒中，通过测定荧光素酶报告基因的表达情况，测定Survivin与AFP基因启动子的转录活性，同时采用巨细胞病毒启动子为对照，评价其转录活性水平。结果Survivin启动子在肝癌细胞中具有相当强的活性，其活性水平在高表达AFP的肝癌细胞中为AFP启动子的54～100倍，达到巨细胞病毒启动子活性的16%～21%。结论Survivin启动子在肝癌细胞系中具有较强的启动活性，可望开发成为新的肝癌靶向性基因治疗工具。

癌,，肝细胞，启动区(，遗传学)，，基因疗法， Survivin基因