MicroRNAs (miRNAs) are present in both plant and animal kingdoms and represents a growing family of non-coding RNAs. These tiny RNAs act as small guides and direct negative regulations usually in the process of development through sequence complementarity to target mRNAs. Although a large number of miRNAs have been identi?ed from various animals, so far plant miRNA studies have focused mainly on Arabidopsis. Here we describe the identification of 20 miRNAs from a rice cDNA library. All the miRNAs were presumably processed from precursors with stem±loop structures and were positively detected in rice cells from at least one tissue, some of which showed tissue-specific expression. Twenty-three unique rice genes were identified to be feasible targets for seven rice miRNAs, including four members of Scarecrow-like transcription factor, the targets of miR-39 that had been characterized in Arabidopsis. Lacking long complementarity, the regulatory targets of 13 miRNAs remain to be further investigated. A possible mechanism of translational repressor for plant miRNAs that lack perfect complementarity to target mRNAs is discussed.

To augment the immunogenicity of the subunit B of Shiga toxin (Stx2e B) produced by Escherichia coli and protect piglets from edema disease in china, a fusion gene was constructed consisting of Stx2e B genetically linked at the N-terminus of the B subunit of heat-labile enterotoxin (LTB) in a translational fusion. After being induced with IPTG, the expressed fusion protein of Stx2e B-LTB was about 8.8% of total proteins, approximately 13 mg/ml of the bacteria culture. The Stx2e B-LTB fusion protein was found to be nontoxic to Vero cells at the dose higher than 1 mg/ml and to mice less than 100 mg/ml. Antibody titer against the fusion protein Stx2e B-LTB was 1:76, 800, much higher than that of the recombinant Stx2e B protein (1:12, 800) alone. All of the mice immunized with the Stx2e B-LTB fusion protein survived when challenged with a lethal dose (LD) of Stx2e toxin. The results showed that the poor immunogenicity of Stx2e B was overcome by conjugating the stx2e B to ltB. The immunogenicity of the constructed fusion protein Stx2e B-LTB in the present study was highly qualified to protect animals against Shiga toxin produced from Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC). The fusion protein of Stx2e B-LTB could be a candidate for a vaccine against edema disease and post-weaning diarrhea simultaneously in piglets.

用聚合酶链反应扩增出猪源大肠杆菌编码ST前体（pro-ST）和Lt的B亚单位（LTB）成熟多肽的序列，再通过套式PcR将pro-ST编码序列3'端和LTB编码序列5’端融合，并置于同一词读框内，得到SL和LTB的融合基因，将此序列克隆到pGEM-T质粒中，序列分析后，亚克隆到表达载体pOE30中，在大肠杆菌细胞中得到表达，表达的融合蛋白同时具有田和LTB的抗原性，且无ST和LT的生物毒性。

从仔猪水肿病样品中分离的一株大肠杆菌菌株NP962l 抽提染色体DNA，构建NP962l 的总DNA文库，经菌落原位杂交筛选、限制酶酶切和southem 印迹等分析，获得含有志贺样毒素基因的重组质粒，核苷酸序列分析表明，该基因的A亚基与SLt-IIes的同源性为97.6%-98.1%，与SLT-IIc\SLT-IId及EHEc 0157:H7产生的SLT-II的A亚基之司的同源性分别为93.1%、93.0%和92。9%；B亚基与SLT-lles的同源性为99.62%-100%，与SLT-iiC\slt：IId及slt-II的同源性分别为81.5%、81.15和81.5%；与29种已知序列的SKT-II slt-i及志贺毒素stx进行聚类分析，结果证实大肠杆菌NP9621菌株中的志贺样毒素基因属于一种新的slt-II亚型。SLT-IIE/NP962l的A亚基与其它slt-IIe之司存在7-9个氨基酸的差异B亚基的氨基酸序列完全相同，与A亚基毒力活性密切相关的氨基酸分别为Thr4、Glu167 Arg170 和Arg176。

【目的】紫杉醇是重要的抗癌药物，主要从罗汉松等植物中提取，为了保护罗汉松等种质资源，本文从罗汉松植株中分离产紫杉醇内生真菌，并对内生真菌所产紫杉醇的抗肿瘤活性进行了分析。【方法】采用组织块法自罗汉松的根、茎、叶等组织中分离内生真菌：通过四唑蓝（Methvl ThlazolvlTetrazollum，MTT）比色法筛选有抗肿瘤活性的内生真菌菌株，通过薄层层析（Thln Laver chro-matography，TLc）和高效液相色谱（H1gh Performance L1quld chromatography，HPLc）对内生真菌所产活性物质进行鉴定：采用抽提法抽提内生真菌所产紫杉醇，应用vero细胞对抽提的紫杉醇的活性进行了分析。【结果】从罗汉松属（Podocrapus）植物中分离到155株内生真菌，其中28株内生真菌具有较高的抑癌活性。将其中一株菌株A2命名为EPTP-1，经形态学和分子分类学分析鉴定为烟曲霉（Aspergillus fumigatus）菌株EPTP-1中抽提的紫杉醇5.553ug/L～555.3ug/L作用24h表现出明显的致细胞凋亡作用。菌株EPTP-1发酵5天时紫杉醇的产率为0.5578±0.0294mg/L。【结论】从罗汉松中分离到了一株产紫杉醇内生真菌EPTP-1，可作为紫杉醇类药物工业化生产的候选菌株。

以两对合成的寡核苷酸引物，通过聚合酶链式反应，检测158份猪和牛腹泻粪便分离物，从8份猪源和3份牛源分离物中扩增出大肠杆菌志贺样毒素基因片段，其生化试验符合大肠杆菌特征，经v目。细胞检测均产生志贺样毒素，血清学试验证实分属不同的血清型，与志贺样毒素大肠杆菌血清型范围相符。

应用间接血凝（IHA）试验和环状沉淀试验对湖北、湖南、河南、江西和辽宁等省送检的病料中分离的猪源致病性链球菌63株进行了血清学分群鉴定，两法的结果是一致的。鉴定出c群40株，D群8株，E群11株，R群4株。采用以上两法对鄂、湘、赣、豫等4省的20个猪场随机抽样的414份不同猪群的血清进行链球菌群特异性抗体检测，在IHA法中的阳性率：c群52.90%，D群14.73%，E群18.36%，R群4.35%，环状沉淀试验中以上四群的阳性率分别为46.145，12.08%，1473%和3.14%。两种方法的总符合率为84.22%。

解耦联蛋白3（uncouphllg proteill 3，uCP3）是调节能量和脂肪代谢的重要因子。以商品猪（杂交猪）为对照，采用sscP方法对贵州地方猪品种糯谷猪和萝卜猪的ucP3基因进行了多态性分析。结果表明：3个猪群体中，都检测到了3种基因型（从、BB、AB），X2独立性检验结果显示，3种基因型在3个群体间的分布不一致，糯谷猪和萝卜猪以AB基因型为主，杂交猪以BB基因型占优势，杂交猪与地方猪种之间的差异显著（P<0.01）；对纯合基因型的ucP3基因片段进行克隆测序。证实从基因型中ucP3基因外显子6编码区第842位碱基发生了单碱基突变（T—c），导致编码的氨基酸从苏氨酸突变为甲硫氨酸。进一步分析3种基因型与胴体和内质性状之间的相关性，证明AB基因型个体的内质最优，贵州地方猪种的大理石纹、肌内脂肪含量和嫩度3项指标显著优于商品猪（p<0.01），因此推测ucP3基因与贵州地方猪种的肉质性状具有相关性，可能是贵州地方猪种肉质性状的候选基因。

采用特异性引物自贵州黑羽乌骨鸡胃部组织克隆了Ghrelin的基因，基因全长12330bp，含有4个外显子，3个内含子。采用RT—PcR技术，获得了Ghrelin cDNA版式段（563bp），Il序列分析推测，通过可变剪切可产生两mRNA，cDNA编码区与基因组中的编码区完全一致。黑羽乌骨鸡Ghrelin基因与已知鸡种比较有13～18个碱基不同，相似性为99.1～99/3%，但其氨基酸序列完全一样，表明禽类 Ghrelin。多肽高度保守。将其 Ghrehn编码区亚克隆到原II核表达载44kpTYBll中，经序列测定碱基序列正确，获得重组质：pTYBll/G。在IPTG的诱导下，重组质粒在大肠杆菌ER2566中获得表达。当ODm=0.5，IPTG浓度1mmol/L，诱导5小l时的表达量最高，融合蛋白占细胞总蛋白40%。采用几质结合的预装柱对表达产物进行l纯化，产率约为5 mg/L培养液。

生长分化因子9（GDF9）是卵母细胞分泌的生长因子，对早期卵泡的生长和分化起重要的调节作用。采用RFJP和sscP方法检测贵州白山羊GD，9基因外显子2的单核苷酸多态性，结果表明：在所有检测样本中均未发现GDF9基因的FecGh突变；在高繁殖率（3羔以上/胎）母羊和公羊中检测到8个杂合的AB基因型，其中5个为高产的母羊，3个为公羊。碱基序列分析证实GD丹基因编码区第1 189 bp位点的碱基由G突变为A，该位点位于外显子2中，导致活性肽第79位缬氨酸突变为异亮氨酸（V79I）。但在低繁殖率（1—2羔/胎）母羊中没有发现该突变。虽然贵州白山羊GDF9基因中G1189A突变的发生率仅为5%，但该位点编码的氨基酸与FecGh突变（s77F）仅相隔1个氨基酸，因此推测GD冈基因中的G1189A突变可能与贵州白山羊的高繁殖力有关。