superficial infections and potentially lethal infections, and the search for an effective vaccine to prevent GAS infections has been ongoing for many years. This paper compares the immunogenicity and immunoprotection of FbaA (an Fn-binding protein expressed on the surface of GAS) with that of M protein, the best immunogen of GAS. Assay for immune response showed that FbaA, similar to M protein, could induce protein-specific high IgG titer in BALB/c mice. Furthermore, following GAS challenge, the mice immunized with FbaA showed the same protective rate as those with M protein. These results indicate that FbaA is similar in ability to M protein in inducing protective immunity against GAS challenge in mice.

目的：研究一种基于丙型肝炎病毒（HCV）多个抗原的重组联合疫苗。方法：将三种Hcv重组抗原F4HVRI、HCV-T和HCV-E1混合，联合免疫BALB/c小鼠，用ELISA检测血清抗体滴度；第三次免疫后10天杀死一半小鼠，取脾细胞，用乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测细胞毒性T淋巴细胞（CIL）活性；用EHSPOT法检测分泌IFN-y和IL-4的细胞；用流式细胞仪检测CD4+T和CD8+T细胞；最后一次免疫后2周，在免疫小鼠的背部皮下注射1.0×106个SP2/0-NS3细胞，考察联合免疫对小鼠的保护作用。结果：F4HVRI+HcV-T+HCV-E1联合免疫诱导了高滴度的HCV-E1和F4HVRI特异性的IgG抗体以及高水平的CTL活性；与单独免疫相比。联合免疫诱导了平衡的Th1/Th2免疫应答；而且联合免疫后能显著预防SP2/0-NS3对小鼠的攻击。结论：F4HVRI+HCV-T+HCV-E1诱导了保护性的体液免疫和细胞免疫应答，有望开发为一种有效的重组HCV联合疫苗。

目的：制备抗A组溶血性链球菌（GAS）表面蛋白Fba（fibronectin-binding proteins a）的单克隆抗体（mAb），并对单抗的生物学功能及其相应表位进行了初步鉴定。方法：以重组Fba蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠，运用杂交瘤技术及间接ELISA筛选出针对Fba的杂交瘤细胞株，以Western blot鉴定mAb的特异性，并将获得的mAb与Fba+GAS和Fba-GAS分别行全菌ELISA、与Fba的分段表达蛋白行Western blot，初步鉴定mAb针对的表位所在区域。结果：获得了稳定分泌抗Fba-mAb的杂交瘸细胞株，其中一株mAb能特异结合天然Fba+链球菌，且该单抗针对的表位包含了Fba蛋白的第104～108位氨基酸，该位点也是链球菌Fab蛋白结合补体调节蛋白FH的位点。结论：成功地制备了抗GAS表面Fba蛋白的mAb，其中一株mAb对应的表位为位于菌体表面的天然表位，并检测出了该mAb对应的表位所在区段，这为深入研究GAS的致病机制提供了有力工具。

目的 研究A族链球菌（GAS）表面新型纤连蛋白Fba的免疫原性，探讨GAS感染机体的免疫应答机制。方法 PCR扩增fba基因，测序正确后克隆至原核表达质粒pGEX4T-2，并在-E. coli BL21中表达，应用ELISA和Western印迹法鉴定目的蛋白表达，以该蛋白作为抗原，包被酶联板，检测GAS全菌免疫鼠血清、33份抗链球菌“O”阳性患者血清。同时，将该蛋白免疫Balb/C小鼠，3次免疫后收集皿清，检测IgG效价。结果 ELISA和Western印迹证实，表达的Fba重组蛋白可与已知兔抗Fba阳性血清产生特异性反应；且Fba蛋白可与GAS全菌免疫鼠血清、抗链球菌“O”阳性患者血清发生特异性结合。Fba蛋白免疫小鼠后抗血清IgG效价达1：4800。结论 GAS感染或Fba蛋白免疫动物后均可诱导动物体产生Fba抗体，该抗体与Fba重组蛋白可产生特异性反应，提示Fba蛋白具有良好的免疫原性和抗原性。Fba蛋白可作为GAS的候选疫苗及检测GAS感染患者血清效价的重要工具。

目的 研究两个丙型肝炎病毒（HCV）多表位重组抗原联合免疫后诱导的细胞免疫和体液免疫应答，以及对小鼠的保护作用。方法 用两个多表位抗原HCV-T和HCV-E1联合免疫BALB/e小鼠3次，ELISA检测血清中抗体IgG、IgCl和IgG2a滴度；最后一次免疫后10d杀死一半小鼠，取脾细胞，用乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测细胞毒性T淋巴细胞（CTL）活性；ELISPOT法检测分泌IFN-y和IL-4的细胞；最后一次免疫后2周，在免疫小鼠的背部皮下注射106个SP2/0-NS3细胞，考察联合免疫对小鼠的保护作用；另取BALII/e小鼠，先在背部皮下注射106个SP2/0-NS3细胞，7d后开始联合免疫，免疫3次，考察免疫治疗作用。结果 用HCV-T+HCV-E1联合免疫诱导了高滴度的HCV-E1特异性的IgG、IgG1和IgG2a抗体以及高水平的CTL活性；与单独免疫相比，联合免疫产生的分泌IFN-y和IL-4的细胞数量有协同作用；而且联合免疫能有效预防和治疗SP2/0-NS3对小鼠的攻击。结论 HCV-T+I-ICV—E1联合免疫诱导了保护性的体液免疫和细胞免疫应答，有望进一步开发为一种有效的重组IICV疫苗。

目的 研究两种HCV重组蛋白联合免疫小鼠所诱导的免疫应答及免疫保护作用。方法 用两种重组蛋白HCV-T和HCV-第一高变区多片段重组融合蛋白（F4HVR1）分别与联合免疫BALB/e小鼠，共免疫3次，用ELISA方法测定血清特异性抗体；末次免疫后14 d处死5只小鼠，分离小鼠脾细胞。体外检测IFN-7、IL-4和行CTL杀伤实验；剩余的小鼠背部皮下注射1.0×10。个SP2/0-NS3细胞，观察其保护作用。组间均数差异采用LSD-t检验。结果 与PBS组相比，用HCV-T和HCV-F4HVRl联合免疫诱导了针对HCV-F4HVRl的特异性的IgG（t-3.815，3.762，P<0.05）、高水平的HCV-NS3特异性的CTL效应（t=3.971，P<0.05）和高水平的IL-4（t=3.813，3.426，3.671，P<O.05）和IFN-7（t-3.512，3.417，P<0.05）的分泌。结论 用HCv.T和HCV-F4HVRl联合免疫小鼠可诱导出高水平的特异性体液免疫和细胞免疫，能有效地预防SP2/O-NS3细胞的攻击。

目的：构建新发现的A族链球菌（GAS）表面蛋白Fba 的真核表达质粒，并将其以及Fba蛋白、M 蛋白分别免疫小鼠，对它们诱导的体液免疫及细胞免疫应答进行评价分析。探讨Fba 蛋白作为GAS候选疫苗的可能性。方法：以SSI-9菌株（GASM 1血清型标准株）作为模板，采用PCR方法扩增Fba基因，测序正确后克隆至真核表达质粒pcDNA3.1，构建真核表达质粒pcDNA3.1/fba；将雌性CD1小鼠随机分成6组，分别为Fba蛋白免疫组、M 蛋白免疫组、pcDNA3.1/fba+Fba蛋白免疫组、pcDNA3.1/fba免疫组、pcDNA3.1空质粒对照及PBS对照组。EL ISA检测各免疫组血清IgG的动态变化水平；脾细胞增殖试验检细胞增殖水平，并用流式细胞术检测小鼠体内CD4+ 、CD8+ 淋巴细胞的变化。试验结果经SPSS10. 0统计处理。结果：成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1/fba；质粒或蛋白免疫后小鼠IgG产生水平以Fba蛋白免疫组增高最为明显，其次为Fba质粒蛋白混合免疫组及Fba质粒组。特异性抗原诱导后体外脾细胞增殖试验显示：pcDNA3.1/fba免疫组增殖水平明显高于其它组，流式细胞检测结果与此一致，并显示以CD4+ T细胞水平升高为主，CD8+ T细胞水平在各组别之间也有一定的差异。结论：（1） Fba 蛋白与M 蛋白一样均能有效地诱导机体产生抗体，提示Fba蛋白很有希望成为GAS的候选疫苗。（2）成功构建了Fba蛋白的真核表达质粒pcDNA3. 1/fba，且该重组质粒能有效地诱导抗链球菌所需的抗体，并能增强CD4+ T 细胞、CD8+ T细胞的增殖功能。

目的：对A族链球菌Fba蛋白McAb2所对应的表位进行定位。方法：以初步定位的表位区段为线索合成三段重叠多肽，dot-ELISA检测McAb2与合成肽的亲合力，并以McAb2为靶分子，利用噬菌体随机七肽库进行亲和筛选，用竞争ELISA鉴定阳性克隆。结果：dot-ELISA检测结果表明Fba100-112肽段与McAb2的结合能力最强。经过3轮亲和筛选后，随机挑选20个噬菌体克隆，竞争ELISA对其与McAb2的亲和力做检测，其中12个克隆显示较强的阳性结果。阳性克隆DNA测序，与Fba基因第100位氨基酸至110位氨基酸中ITPDL同源性较高。结论：通过dot-ELISA将A族链球菌Fba蛋白McAb2对应的表位定位于100～112位氨基酸，结果同噬菌体随机肽库筛选的核心氨基酸位置吻合。为进一步研制表位肽疫苗、研究Fba蛋白及其单克隆抗体的生物学功能奠定了基础。

A族链球菌（group A. Streptococcus，GAS）在临床上存在着反复感染及难以治愈等问题。Cleary的研究[1]证明，GAS可以侵入细胞而逃避攻击。Fba，是一种新型表面蛋白，由M1血清型GAS 90-226分离株表达。以往研究资料显示，M1血清型GAS能通过其表面的Fba蛋白结合宿主补体旁路激活途径中协助Ⅰ因子降解C3b的两种重要蛋白FH、FHL-1，并以此促进GAS进入上皮细胞，可能与逃避抗生素作用及免疫系统攻击有关[2]。本研究拟通过对5个临床分离的Fba菌株（Ⅰ～Ⅴ）的实验，了解Fba与FH/FHL-1的相互作用关系，为进一步阐明GAS致病机理提供实验依据。

Hepatitis C virus (HCV) has emerged as the major pathogen of liver disease worldwide. The mechanisms of HCV infection and interaction with a host are poorly understood. What exactly is required for efficient control of HCV infection is largely unknown. Standard treatment combining interferon-(IFN-) and ribavirine is effective in about 50% of the treated patients, however associated with significant toxicity and cost. Therefore, the development of new drugs or vaccines is urgently needed. An efficient vaccine against HCV infection requires induction of broad cellular and humoral immune responses against several viral proteins. We have engineered the combined vaccine candidate mT+mE1, an inclusion of multiple epitopes from HCV NS3, core (C) and E1 proteins. mT contains multiple conserved CD4+ and CD8+ T cell epitopes fromHCVNS3 and C proteins.mE1is based on eight dominant neutralizing epitopes of E1 protein from six HCV genotypes. In current study, we showed that immunization with mT+mE1 induced high titers of IgG, IgG1 and IgG2a antibodies to mE1, and high level of NS3-or C-specific CTLs. Furthermore, mT+mE1 elicited a Th1-biased immune response with secretion of high amounts of IFN-1, compared with mT alone. Prophylactic as well as therapeutic administration of mT+mE1 in BALB/c mice led to protecting mice against SP2/0 tumor cells expressing HCV NS3 protein. These results suggested that mT+mE1 elicited strong humoral immune responses and multiple specific cellular immune responses. The vaccine candidate is now being tested in pre-clinical trials.