本文主要目的是研究肝细胞癌（HCC）中血管内皮生长因子（VEGF）过度表达与HCC组织中缺氧的关系。通过免疫组织化学链霉亲合素-生物素-过氧化物酶复合体（SABC）法检测36例HCC组织及其相应癌旁肝组织和6例正常肝组织中缺氧诱生因子1α（HIF-1α）、VEGF 和微血管密度（MVD）的表达，并对这些指标进行相关分析。离体实验中用缺氧诱导剂氯化钴刺激人肝癌细胞系HepG2，采用半定量逆转录－聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学检测VEGF的表达情况。RT-PCR结果表明36例HCC 组织中HIF-1α强阳性3例（8.3%）、弱阳性21例（58.3%）、阴性12例（33.3%）；VEGF强阳性16例（44.4%）、弱阳性16 例（44.4%）、阴性4例（12.2%）。等级相关分析显示HCC中VEGF的表达与MVD的表达、HIF-1α的表达与VEGF的表达均具有正相关关系（P<0.01）。氯化钴可以以浓度和时间依赖性的方式诱导HepG2细胞中VEGF 的转录。这些结果表明HCC中存在的缺氧是HCC组织中VEGF过度表达的始动因素之一。

目的 研究不阻断肝门的肝切除术在大肝癌切除手术中的价值。方法 回顾性分析30例不阻断肝门的大肝癌切除术，并与同期98例采用肝门阻断的大肝癌切除术做对比。采用单因素和多因素分析的方法，研究与大肝癌术后并发症有关的因素。结果 不阻断肝门组术后并发症率低于阻断肝门组（1010% vs 3217%，P=0102）。单因素分析显示年龄、肝门阻断、术中出血量、输血量以及手术时间等与并发症发生有关，进一步通过多元逐步回归模型分析发现，年龄、肝门阻断、输血量以及手术时间是决定术后并发症发生的4个独立的预测指标。结论 大肝癌切除手术中有选择性地采用不阻断肝门的肝切除技术是安全可行的。

目的 研究肝细胞癌（HCC）中血管内皮生长因子（VEGF）、缺氧诱生因子1 alpha（HIF-1α）和表皮生长因子（EGF）的表达情况及其临床意义。方法 采用免疫组织化学SABC法检测36例HCC组织及其癌旁肝组织和6例正常肝组织中VEGF、HIF-1α和EGF的表达情况，研究这3个因子与HCC临床病理学资料、新生血管生成以及预后的关系。结果 36例HCC中VEGF、HIF-1α和EGF表达的阳性率分别为89%（32/36），67%（24/36）和75%（27/36），均高于相应的癌旁肝组织和正常肝组织（P<0.05）。光学显微镜下有静脉浸润的HCC组织中VEGF和HIF-1α的表达率分别为96%（23/24）和88%（21/24），高于光学显微镜下无静脉浸润者（75%和25%），差异有显著意义（P<0.05）。VEGF阴性组术后1、2年生存率均为100%，弱阳性组分别为87%和22%，强阳性组分别为54%和0，三组存活率的差异具有显著意义（P<0.05）。EGF 阴性组术后1、2年存活率分别为100%和60%，弱阳性组均为70%，强阳性组分别为27%和0、三组之间存活率的差异亦具有显著意义（P<0.05）。结论 HCC组织中VEGF、HIF-1α和EGF呈过量表达。HCC组织中VEGF、EGF和HIF-1α的表达与HCC中新生血管生成以及预后不良有密切关系。

目的 研究肝细胞癌（HCC）中表皮生长因子（EGF）与血管内皮生长因子（VEGF）过量表达的关系。方法 通过免疫组化SABC法，检测36例HCC组织及其相应癌旁肝组织和6例正常肝组织中EGF、VEGF和微血管密度的表达，并对这些指标进行相关分析。离体实验中，用重组人EGF刺激人肝癌细胞系HepG2，采用半定量逆转录PCR检测VEGF的表达情况。结果 36例HCC组织中，EGF和VEGF表达阳性率分别为75.0%和88.9%。Spearman等级相关分析显示，HCC组织中EGF的表达与VEGF的表达具有明显的正相关关系（r=0.462，P<0.01) 。重组人EGF可以以浓度和时间依赖性的方式诱导HepG2细胞中VEGF的转录。结论 HCC中EGF的表达是VEGF过量表达的基本原因之一。

目的 建立化疗药物丝裂霉素诱导肝癌细胞凋亡的模型，初步探讨在该凋亡过程中重要凋亡相关基因p53和bcl-2的调控作用。方法 用丝裂霉素诱导人肝癌细胞系HepG2凋亡，荧光显微镜和透射电镜观察肝癌细胞的形态学改变，琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞DNA片段的梯状条带，用流式细胞仪免疫荧光法检测凋亡不同时期P53和Bcl-2蛋白的表达量。结果 8mg/ml丝裂霉素作用12，24，48h后，P53蛋白表达量明显增高，尤以12h明显，而后逐渐下降。Bcl-2蛋白在整个凋亡过程中无明显变化。结论 在化疗药物丝裂霉素诱导肝癌细胞凋亡过程中，p53基因参与了调控，并为凋亡信号传导途径中的早期事件。丝裂霉素诱导的肝癌细胞凋亡途径为p53依赖方式，而在该凋亡过程中，bcl-2基因的调控并不重要。

目的 研究孤立性原发性大肝癌的分子病理特征。方法 比较20例孤立性大肝癌与13例小肝癌、10例结节性肝癌的病理特征，并且采用免疫组织化学方法检测三组肝癌组织中与恶性肿瘤侵袭转移有关分子标志物的表达情况，包括PTEN蛋白、Survivin 蛋白、整合素αv 亚基、基质金属蛋白酶2（MMP2）以及微血管密度（MVD）。结果 孤立性大肝癌大多有包膜且呈膨胀性生长，肝硬化少，癌细胞分化较结节性肝癌好（P<0.05）。孤立性大肝癌的Survivin蛋白、整合素αv亚基、MMP2的表达及MVD均低于结节性肝癌，而PTEN蛋白明显高于结节性肝癌（P<0.05)，上述指标在孤立性大肝癌组与小肝癌组比较均无统计学差异（P>0.05）。结论 孤立性大肝癌具有特殊的临床和分子病理特征及相对好的肿瘤生物学行为。

目的 研究单结节原发性大肝癌的病理特征及与侵袭转移相关的分子标志物表达情况，以探讨其生物学特征。方法 比较20例单结节大肝癌与13例小肝癌、10例多结节肝癌的病理特征，用免疫组化方法检测并比较这三组肝癌中整合素αv亚基、基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase22, MMP-2）的表达及肿瘤微血管密度（microvessel density, MVD）。结果 单结节大肝癌的肝硬化、细胞分化程度明显较多结节肝癌轻和好（P<0105），而癌组织坏死较小肝癌明显（P<0105）。整合素αv亚基、MMP-2的表达及MVD值在单结节肝癌中比在多结节肝癌中弱或低（P<0105） 。结论 单结节大肝癌比多结节者有相对良好的生物学行为特征，而与小肝癌相近。

目的 探讨Fas抗原和Caspase-8在化疗诱导人肝癌细胞凋亡中的调控作用。方法 用1×10-2mol/L浓度的氟尿嘧啶处理HepG2细胞，分别作用4、8、16、24 h。免疫细胞化学法检测Fas抗原的表达。用荧光试剂盒检测Caspase-8的活性。流式细胞仪检测氟尿嘧啶或抗-Fas-抗体诱导的肝癌细胞凋亡百分率，以及加入Caspase-8活性抑制剂IETD-FMK后凋亡百分率的变化。结果 氟尿嘧啶诱导HepG2细胞凋亡后，与对照组比较，Fas抗原表达强度增加（P<0.01），Caspase-8活性升高（P<0.01）。Fas抗原表达和Caspase-8活性随着氟尿嘧啶作用时间的延长而逐步升高,至16h后达到高峰，然后下降,但仍显著高于对照组（P<0.01）。Fas抗原的表达与Caspase-8活性变化呈显著正相关（r=0.969，P<0.01）。表达增强的Fas抗原具有转导凋亡信号的功能，借此抗-Fas-抗体增强了氟尿嘧啶诱导的HepG2细胞凋亡。Caspase-8活性抑制剂IETD-FMK能阻断Caspase-8活化而抑制氟尿嘧啶或抗-Fas-抗体诱导的HepG2细胞凋亡，实验组和抑制剂组比较，细胞凋亡百分率有显著性差异（P<0.01）。结论 氟尿嘧啶诱导HepG2细胞经Fas依赖途径凋亡。Caspase-8活性上调在该凋亡过程中发挥重要作用。

AIM: To study the difference in gene expression between solitary large hepatocellular carcinoma (SLHCC) and nodular hepatocellular carcinoma (NHCC). METHODS: Polymerase chain reaction (PCR) products of 8464 human genes were spotted on a chip in array. DNAswere then fixed on a glass plate. Total RNA was isolated from freshly excised human SLHCC (n=7) and NHCC (n=15) tissues, and was reversely transcribed to cDNAs with the incorporation of fluorescent dUTP for preparation of hybridization probes. The mixed probes were then hybridizedto the cDNA microarray. After highly stringent washing, cDNA microarray was scanned for the fluorescent signalsto display the difference between the two kinds of HCC. In addition, the expression of RhoC and protocadherin LKC was also detected with the reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) method. RESULTS: Among the 8464 human genes, 668 (7.89%)genes were expressed differentially at the mRNA levels between SLHCC and NHCC. Three hundred and fifty five (4.19%) genes, including protocadherin LKC, were upregulated,whereas 313 (3.70%) genes, including RhoC, were down-regulated. The mRNA expression levels of RhoC and protocadherin LKC were confirmed by RT-PCR. Analysis of differentially expressedgenes confirmed that our molecular data obtained by cDNA microarray were consistent with the published biochemical and clinical observations ofSLHCC and NHCC. CONCLUSION: cDNA microarray is an effective technique in screening the difference in gene expression between SLHCC and NHCC. Many of these differentially expressed genes are involved in the invasion and metastasis of HCC.Further analysis of these genes will help to understand thedifferent molecular mechanisms of SLHCC and NHCC.

AIM: To study the relationship between hypoxia or epidermal growth factor (EGF) and the overexpression of vascular endothelial growth factor (VEGF) in hepatocellular carcinoma (HCC) and the signal transduction pathway of the transcription of VEGF in hepatoma cells. METHODS: Cobalt chloride and recombinant human EGF were used to stimulate the hepatoma cell lines HepG2. VEGF mRNA was detected by using of semi-quantitative polymerase chain reaction (RT-PCR). Specific inhibitors of phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) and p42/p44 mitogen activated protein kinase (MAPK) were used to observe the effects of the two kinases on the regulation of the transcription of VEGF in hepatoma cells. RESULTS: The expression of VEGF mRNA in HepG2 cells cultured in serum-free mediumwas 0.117. However, 100 nmol/L cobalt chloride for 24 h increased the expression of VEGF mRNA and VEGF mRNA increased gradually with the increase of the concentration and duration of cobalt chloride. Also, 25ng/mL recombinant human EGF stimulated the expression of VEGF in HepG2 cells and the expression increased with the increase of EGF concentration. 5nmol/L LY294002 inhibited the expression of VEGF stimulated by cobalt chloride or recombinant human EGF and the inhibition decreased step by step with increase of the concentration of LY294002. But even 20 mol/L LY294002 could not completely block theexpression of VEGF. In contrast, PD98059 had no inhibitory effects on the transcription of VEGF stimulated by cobalt chloride or recombinant human EGF. CONCLUSION: The overexpression of VEGF in HCC could be promoted by hypoxia and EGF expression in HCC. The signal transduction pathway of VEGF transcription in HepG2 cells may be through PI3K pathway, but not through p42/p44 MAPK pathway.