目的：探讨小鼠脐血(umbilicalcordblood，UCB)造血干/祖细胞含量与特性。方法：采用体外集落培养和流式细胞术检测C57BL/6(H-2b)小鼠脐血与骨髓(bonemarrow，BM)造血干/祖细胞。结果：小鼠脐血培养7d粒单系祖细胞(CFU-GM)及早期红系祖细胞(BFU-E)集落产率与骨髓相近，但14dCFU-GM、多向祖细胞(CFU-GEMM)明显高于后者(P<0105)，且见含细胞多体积巨大的致密型集落。脐血CD34+Sca-1+细胞亚群也明显高于骨髓(P<0.05)。结论：小鼠F脐血富含造血干/祖细胞，具有高增殖潜能。

目的评估异基因外周血造血干细胞移植(allo-PBSCT)治疗β地中海贫血(β地贫)的临床疗效和合并症。方法allo-PBSCT治疗9例小儿L重型β地贫，男4例，女5例；年龄2～14岁(中位数9.0岁)。同胞供者8例，亲属供者1例；供者年龄3～33岁(中位数13岁)；男6例，女3例。HLA全相合7例，5/6相合1例，4/6相合1例。供者皮下注射G-CSF5μg/(kg•d)×5d，用CS3000Plus血细胞分离机采集PBSC。预处理方案以白消胺(Bu，14～20mg/kg)、环磷酰胺(CTX，160-200mg/kg)和马抗胸腺细胞球蛋白(ATG，90mg/kg)为基础，6例加用噻替哌(TT)、2例马法兰(Melph)和氟哒拉宾(Fludarabine)。移植物抗宿主病(GVHD)预防方案有：①单独环孢素(CsA)方案(2例)；②CsA+短程甲氨蝶呤(MTX)方案(4例)；③CsA+短程MTX+霉酚酸酯(MMF)方案(3例)。受者获得的有核细胞(NC)数10.4(4.7～18.4)×108/kg，CD34+细胞数6.7(2.1～14.9)×106/kg，CFU.GM14.2(3.5～42.9)×10/kg。结果8例患儿植入，1例同胞HLA4/6相合患儿于2次PBSCT后d+60才自体恢复。aGVHD6例，cGVHD4例。CsA、MTX联合MMF方案者尤cGVHD发生，而CsA或CsA+MTX的6例中发生cGVHD4例。随访时间11～67个月(中位数31个月)，总牛存率6/9例，无病生存(EFS)6/9例。结论allo-PBSCT是治疗地贫的有效临床方法。

目的：观察在“Bu+Cy+ATG”典型预处理中加入氟达拉滨（Flu）对脐血造血干细胞移植（UCBT）治疗重型β地中海贫血（地贫）的植入和移植物抗宿主病（GVHD）的影响。方法：2000年6月至2004年6月中山大学附属二院儿科对22例行脐血干细胞移植的地贫患儿，按预处理方案是否含Flu分为无Flu组（8例）和Flu组（14例）。无Flu组：Bu，Cy和马抗人胸腺细胞球蛋白（ATG）；Flu组在此基础上加Flu。观察两组植入率，急、慢性GVHD（aGVHD、cGVHD）的发生率及其程度。结果：无Flu组8例患儿HLA全相合5例，不全相合3例，接受单个核细胞（MNC）为7103×107/kg[（417～1217）×107/kg]，其中CD34+数为410×105/kg[（016～1117）×105/kg]，6例植入，中性粒细胞绝对计数（ANC）≥015×109/L时间平均为18d，血小板（BPC）≥20×109/L时间平均为3615d，4例发生aGVHD，1例发生cGVHD；Flu组14例，HLA全相合6例，不全相合8例，平均输入供者MNC为7153×107/kg[（314～10）×107/kg]，其中CD34+数为5101×105/kg[（016～1117）×105/kg]，4例植入，ANC≥015×109/L时间平均为16d，BPC≥20×109/L时间平均为72d，2例发生aGVHD，3例发生cGVHD；两组植入率、aGVHD及cGVHD发生率无明显差异。Flu组的HLA不全相合病例多于非Flu组。结论：allo2HSCT治疗地贫中，不限定HLA相合条件下，预处理中加入Flu对植入率、aGVHD及cGVHD发生率无明显影响。

本研究旨在亚克隆HLA-E真核表达载体，并使其在HLA-I类阴性的靶细胞K562细胞上获得稳定表达。首先采用PCR方法从多顺反子表达载体(pG/A2E)扩增出目的片段A2/EcDNA，与真核表达载体pcDNA3.1(+)重组，构建成HLA-E真核表达载体pcDNA3．1(+)/A2E，然后采用脂质体转染的方法将重组质粒转入K562细胞，最后经G418筛选及有限稀释，利用抗HLA-E特异的单克隆抗体K0126-3进行FACS检测，以观察}玎LA-E分子在靶细胞表面的表达情况。结果显示，HLA-E分子在经pcDNA3.1(+)/A2E转染的靶细胞表面获得表达(27.76%)，而经空载体pcDNA3.1(+)转染的靶细胞则未获得表达。结论：成功构建了pcDNA3.1(+)/A2E真核表达载体，并使HLA-E分子在HLA-I类阴性的K562细胞表面表达，为进一步研究HLA-E作用的分子机制以及探索HLA-E与NK受体之间的相互作用和HLA-E体外表达对NK细胞功能的影响奠定了基础。

目的：比较亲属异基因脐血造血干细胞移植(UCBT)与亲属异基因外周血造血干细胞移植(PBSCT)治疗遗传性溶血性贫血(溶贫)的临床疗效。方法：16例遗传性溶贫(重型β地中海贫血14例，先天性特发性溶血性贫血2例)中9例行UCBT，7例行PBSCT。预处理方案以白消安14～20mg/kg、环磷酰胺160～200mg/kg和抗胸腺细胞球蛋白90mg/kg为基础，8例加马法兰90mg/m2，2例加噻替哌6mg，4例加噻替哌和氟达拉宾150mg/m2。结果：UCBT组植入7例(7/9)，其中2例于移植术后60d(+60d)内排斥、回复地中海贫血(地贫)状态，1例发生急性肾衰竭死亡；4例出现急性移植物抗宿主病(aGVHD)，1例出现慢性移植物抗宿主病(cGVHD)；中位随访时间49个月(38～64个月)。PBSCT组植入6例(6/7)，无继发排斥，1例发生肝衰竭死亡，1例于+3d死于败血症；5例出现aGVHD，其中3例延续为cGVHD；中位随访时间39个月(25～49个月)。结论：UCBT、PBSCT治疗遗传性溶贫具有不同的特点。PBSCT治疗具有植入率高，GVHD发生率也高的特点。UCBT具有GVHD程度较轻，提示人类白细胞抗原配型不全相合也可开展移植，但应改善低植入率的问题。

[目的]建立环磷酰胺(CTX)预处理脐血移植(UCBT)小鼠模型，并探讨预处理后骨髓龛位腾出的特点和机制。[方法]分别以100，200，380mg/kg3种剂量CTX腹腔注射BALB/c小鼠，检测注射后1周内外周血象、骨髓及外周血CD34+细胞含量、骨髓细胞凋亡及病理学改变。用C57BL/6鼠脐血(FNPB)作供体移植经“致死量“CTX预处理的BALB/c鼠，动态观察移植后受鼠存活状况、植入水平、造血与免疫功能恢复及移植物抗宿主病(GVHD)情况。[结果]在CTX处理后3～4d内，骨髓造血细胞损伤渐加重，血窦结构紊乱，细胞碎屑弥漫分布，外周血与骨髓CD34+细胞水平进行性降低至最低值，下降的速度和程度与CTX剂量呈正比。骨髓细胞凋亡发生率的峰值出现在第1天，第3天恢复正常。FNPB移植能明显提高受鼠存活率，重建部分造血与免疫功能，未见明显GVHD表现，并在受体内检出供体细胞的植入。[结论]成功建立CTX化疗预处理小鼠脐血移植模型。干细胞占据的龛位是在化疗预处理后4d逐渐完成腾空，凋亡是参与此过程的机制之一。

本研究探讨多种细胞因子（TPO、SCF、FL、IL-1、IL-3、IL-6）组合的几种培养体系对人外周血CD34+细胞体外诱导扩增生成巨核细胞的作用，研究人外周血来源的巨核细胞体外扩增的最佳细胞因子组合及培养时间。用Ficoll-Hapaque分离法分离动员的外周血（MPB）单个核细胞，免疫磁珠法分离纯化CD34+细胞，并将其在含胎牛血清的液体培养体系中、各组细胞因子诱导下培养15天。在不同时间点采用血细胞计数板进行细胞计数，采用流式细胞术检测培养体系中CD41+细胞的含量；同时采用甲基纤维素半固体培养法进行巨核细胞集落培养，测定巨核细胞集落形成单位（CFU-MK）的数量。结果表明：经过15天的培养，在MPB来源的CD34+细胞体外诱导并扩增巨核祖细胞体系中，以TPO/FL/IL26/IL23组合的扩增效果最好，明显高于其它3组，CD41+细胞第5天、10天分别扩增了93.97±17.27倍、131.23±18.26倍。第15天CD41+细胞含量及CD41+细胞数迅速下降。CFU-MK产率（/1×103个细胞）第5天、10天分别为83.33±10.02个、120.67±13.01个，明显高于其余3组。结论：以TPO/FL/IL26/IL23因子组合为体外诱导扩增巨核祖细胞的最佳组合，动员外周血的巨核祖细胞体外诱导扩增以培养第10天为宜。本实验建立了动员人外周血来源的巨核祖细胞体外扩增体系。

我们建立了异基因造血干细胞移植（auogeneichematopoieticstemcellransplantation,allo-HSCT）后供-受者细胞嵌合定量的新方法。

目的观察儿童造血干细胞移植(HSCT)中出血性膀胱炎(HC)的发病情况，探讨其发病危险因素和防治策略。方法回顾分析1998年10月—2004年6月本移植中心完成的53例儿童HScT的临床资料，其中脐血移植(UCBT)37例，外周血造血干细胞移植(PBSCT)16例。HC的预防分为2组：(1)常规组(15例)，采用水化、碱化尿液、强力利尿和巯乙磺酸钠(Mesna)；(2)前列腺素E1(PGE1)组(38例)，在常规组的基础上加用PGEl。结果53例中发生HCll例(21%)，其中I度2例(2/11，18%)，Ⅱ度4例(4/11，36%)，Ⅲ度5例(5/11，46%)；11例HC中，早发性4例(36%)，迟发性7例(64%)。HC发病时间为+2d-+25d(中位时间+15d，移植后为“+”)。15例常规预防组中发生。HC2例(13%)，38例PGEl组中发生9例(24%，P>0.05)。单因素分析显示，受者移植年龄≥6岁、预防移植物宿主病(VHD)阳性、巨细胞病毒(cMV)感染组的HC发生率分别高于年龄<6岁(32%vs8%，X2=4.68，P<0.05)、GVHD阴性(35%vs7%，0=5.96，P<0.05)、CMV未感染组(62%vs13%，X2c=7.22，P<0.05)。logistic回归分析表明，HC发病仅与年龄(OR=3.53，P<0.05)和CMV感染(OR=4.31，P<0.05)有显著的相关性。采用充分水化、碱化尿液、选择性输注血小板、抗病毒和尿道膀胱冲洗等综合性治疗，全部病例均获得治愈。结论受者移植年龄≥6岁和CMV感染是儿童HscT并发HC的重要危险因素，PGEl不能降低HC的发生。儿童HSCT后HC预后多良好。