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刘小林
长期从事周围神经损伤修复的临床和基础研究工作。
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- 姓名：刘小林
- 目前身份：
- 担任导师情况：
- 学位：
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学术头衔：
博士生导师
- 职称：-
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学科领域：
外科学
- 研究兴趣：长期从事周围神经损伤修复的临床和基础研究工作。
刘小林，男，49岁，中山大学附属第一医院显微创伤骨科首席专家、学科带头人、教授、博士生导师，1982年医疗专业本科毕业，1987年获外科学硕士学位，1994年获骨科学博士，2000年晋升教授、主任医师。长期从事周围神经损伤修复的临床和基础研究工作。在1998-1999年应世界著名周围神经外科专家瑞典Lundborg教授邀请，赴瑞典Lund大学专门从事神经移植体研究，主要用化学萃取方法制备神经、肌肉无细胞基膜管修复大鼠神经缺损的研究工作。回国后继续深入这方面的研究并领导课题组从事组织工程神经移植体的开发研究，分别以雪旺细胞（Schwan cell，SC）和经BMSCs诱导分化的类雪旺细胞为种子细胞，种植在去细胞异体神经上，构建出组织工程化神经，现已完成了前期基础研究和大鼠与猕猴的体内实验，获国家发明专利和实用新型专利授权各4项（专利号：ZL 2004 1 0027221.4；ZL 2004 1 0027223.3；ZL 2004 1 0027222.9；ZL 2004 1 0027224.8；ZL 2004 2 0045858.1；ZL 2004 2 0045857.7；ZL 2004 2 0045859.6；ZL 2004 2 0045860.9）。近5年来在国内外发表相关论文二十多篇，其中SCI论文6篇，主持完成与本课题相关的1项国家自然科学基金和1项广东省自然科学基金项目。参与完成国家自然科学基金重点项目分题，广州市重大科技项目各一项；主持在研国家自然科学基金面上项目1项，广东省科技重大项目、自然科学基金面上项目各1项和广州市科技重大项目1项。参与专著编写4本。
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2006-11-15
【期刊论文】用去细胞同种异体神经构建猕猴组织工程化神经的实验研究
刘小林， 许扬滨， 胡军， 江长青， 杨光诗， 朱家恺
中华显微外科杂志，2005，28（2）：136～139，-0001，（）：
-1年11月30日
目的评价用自体源骨髓问充质干细胞（MSCs）或许旺细胞（SCs）作种子细胞，与去细胞同种异体神经构建的组织工程化外周神经修复猕猴尺神经4cm缺损的实验效果，为临床研究提供资料。方法分别用4种移植物桥接猕猴4cm尺神经缺损。A组：种植自体MSCs的去细胞同种异体神经；B组：种植自体SCs的去细胞同种异体神经；C组：去细胞同种异体神经；D组：自体神经移植、通过功能学、神经电生理学及组织学指标评价各组修复神经缺损的效果。结果A、B组术后6个月能引起小鱼际肌群产生复合动作电位的潜伏期、复合动作电位的最大振幅、神经传导速度和再生的神经纤维数目与自体神经移植组相比无统计学意义（P>0.05）；但A、B、C、D组分别与C组相比，差异有统计学意义（P>0.05）?结论用自体源SCs或MSCs作种子细胞，与去细胞同种异体神经构建的组织工程化外周神经修复猕猴4cm尺神经缺损，均能取得与自体神经移植相近的效果。
组织工程， 外周神经， 神经移植物， 化学萃取， 猕猴
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2006-11-15
刘小林， 易建华， 朱家恺， 向剑平， 王建云
中华显微外科杂志，2004，27（1）：40～43，-0001，（）：
-1年11月30日
目的探讨猴许旺细胞在标准条件下的培养、扩增与传代。方法根据Wallerian变性后许旺细胞增殖的原理，利用双酶消化法及阿糖胞苷（Ara.C）抑制成纤维细胞生长分裂的方法获取许旺细胞。用S-100抗体鉴定所培养的细胞并用M1Tr法检测这些细胞的增殖能力。结果猴许旺细胞培养15d后可达5×106纯度为92%，MTT测定证实该细胞生长良好。结论神经预变性后，通过消化法和Ara-C处理能获取量大纯度高、活力良好的许旺细胞，可用于组织工程化人工神经的种子细胞。
许旺细胞， 培养， 猴
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2006-11-15
刘小林， 胡军， 朱家恺， 邓宇斌， 向剑平， 易建华， 原清涛
中华创伤骨科杂志：2004，6（5）：538～541，-0001，（）：
-1年11月30日
目的探讨体外诱导猕猴骨髓基质干细胞向雪旺细胞分化的实验方法：方法采用BME、b-FGF、ATRA、BDNFheregulin、Forskolin、PDGF依次联合诱导，倒置相差显微镜观察细胞形念学变化，免疫细胞化学鉴定s-l00蛋白、GFAP和P75受体的表达率。结果诱导后的猕猴骨髓基质干细胞具有类似雪旺细胞的形态，免疫细胞化学结果显示S-100蛋白、GFAP和P75受体的表达率分别为：（66.8±4.6）%、（57.3±5.4）%和（72.4±5.9）%。结论采用BME、ATRA、BDNF、heregulin、Forskolin、b-FGF、PDGF依次联合诱导，可使猕猴骨髓基质干细胞在体外向雪旺样细胞分化。
骨髓基质干细胞， 细胞分化， 雪旺细胞， i弥猴
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2006-11-15
刘小林， 朱庆棠， 朱家恺， 赖英荣， 江长青， 杨光诗， 胡军
中华显微外科杂志，2004，27（1）：35～38，-0001，（）：
-1年11月30日
目的探讨如何去除人类长段粗大神经中的细胞。为构建人类组织工程化神经提供具有仿生结构的支架方法取4段长10cm、直径6mm人的胫神经，其中3段用3%三硝基甲苯和4%脱氧胆酸钠分别萃取1、2和3次，在萃取神经和未萃取神经的中段取材，行HE染色、砂罗铬花青染色和S-100免疫组化染色，在光镜和电镜下观察神经萃取前后形态学的变化结果用三硝基甲苯和脱氧胆酸钠萃取后，胫神经内的细胞消失，I纤维性支架结构与未经萃取的神经相仿，电镜下可见萃取后的神经由空的神经基底膜管和管之间的胶原纤维构成。随着萃取次数的增加，神经内残留的S-100蛋白显著减少，但反复萃取后神经的支架结构受破坏。结论用硝基甲苯和脱氧胆酸钠萃取2次可去除人体长段、粗大神经的细咆而保留完整的神经基底膜管和纤维支架结构，可能是制备具有仿生结构的人类组织工程化神经支架较为理想的方法。
外周神经， 组织工程， 人类， 化学萃取
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2006-11-15
刘小林， 江长青， 胡军， 向剑平， 朱家恺
中华手外科杂志，2005，21（6）：372～374，-0001，（）：
-1年11月30日
目的评价利用化学萃取法获得的神经支架制备猕猴组织工程化周围神经移植物修复40尺神经缺损的效果。方法共使用成年猕猴9只，随机取其中的6只，培养自体雪旺细胞，应用已经制备好的去细胞神经为支架材料构建组织工程化周围神经移植体修复猕猴尺神经的40mm缺损。实验分实验组，空白组，正常对照组3组。术后5个月通过形态学，肌电检测和免疫组织化学方法观察。结果3组均未发现猕猴双手有糜烂或溃疡形成，猕猴小鱼际肌群的饱满度和弹性于术前无明显差别。实验组与正常对照组间小鱼际肌群的运动动作电位潜伏期.最大振幅及再生神经纤维的数目差异均无统计学意义（P>0.05）。但在实验组与空白组间的差异有统计学意义（P<0.05）。结论用自体源雪旺细胞微注入去细胞同种异体神经支架构建的组织工程化神经移植物修复猕猴40ram的尺神经缺损，可取得与自体神经移植相似的效果。
周围神经， 组织工程， 猴， 化学萃取外
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2006-11-15
【期刊论文】猕猴骨髓问充质干细胞与去细胞神经优化人工神经的体外构建
刘小林， 杨光诗， 许扬滨， 朱家恺， 朱庆棠
中华显微外科杂志，2005，28（1）：35～38，-0001，（）：
-1年11月30日
目的探讨猕猴骨髓间充质干细胞作为种子细胞与去细胞同种异体神经作为支架，体外构建人工神经的研究。方法采用密度梯度离心的方法分离并培养猕猴骨髓间充质干细胞，利用相差显微镜观察细胞生长情况并描绘其生长曲线；取猕猴3段4cm的周围神经，其中2段用4%triton-X-100及4%脱氧胆酸钠液分别萃取1次和2次，在新鲜神经和萃取神经中段取材，组织学检测及电镜学观察萃取前后的形态学变化；采用显微注射的方法把猕猴骨髓间充质干细胞种植到萃取两次的异体神经内，HE染色观察细胞在支架内的生长情况。结果猕猴骨髓间充质干细胞自我增殖能力强；萃取1次的异体神经细胞及髓鞘结构仍部分存留，而萃取2次的其细胞及髓鞘结构消失；HE染色可见细胞在萃取2次的异体神经内可爬行生长。结论猕猴骨髓间充质干细胞与化学萃取的去细胞同种异体神经适合体外构建人工神经。
骨髓间充质干细胞， 组织工程， 去细胞神经， 猕猴
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2006-11-15
刘小林， 胡军， 朱家恺， 邓宇斌， 向剑平， 王建云， 邹一丰
中华显微外科杂志，2004，27（2）：113～117，-0001，（）：
-1年11月30日
目的通过体外分离、培养猕猴骨髓基质干细胞（BMSCs），研究其生物学特性、表面标志和遗传学性能，为BMSCs用作组织工程化神经种子细胞提供研究基础。方法通过密度梯度离心分离猕猴BMSCs，体外培养、扩增，用倒置相差显微镜进行形态学的观察，通过绘制生长曲线、计算克隆形成率来研究细胞的活力和增殖能力，流式细胞仪检测表面标志，核型分析反应遗传学性能。结果密度梯度离心的方法能获得较纯的猕猴BMSCs，第7代以前的细胞有较强的活力和增殖能力，具有与人的BMSCs相似的形态和表面标志，体外培养第10代细胞仍稳定为二倍体核型。结论用本实验方法能较容易地获得大量的猕猴BMSCs，具有与人的BMSCs相似的形状和表面标志，第3-6代的细胞可满足以猕猴为动物模型的组织工程化神经种子细胞的研究要求。
猕猴， 骨髓基质干细胞， 细胞培养
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刘小林， 朱庆棠， 朱家恺， 程钢， 黎志明， 许扬滨
中华显微外科杂志，2003，26（2）：127～129，-0001，（）：
-1年11月30日
目的研究聚乳酸、聚羟基乙酸和壳聚糖等可降解材料对正常外周神经有无毒性作用，为研制组织工程化神经筛选相容性好的支架材料。方法取l5只SD大鼠，随机分成3组，打开坐骨神经外膜后，分别将聚乳酸、聚羟基乙酸和壳聚糖植入神经束之间。术后7周取材，观察坐骨神经组织结构的变化以及材料在神经组织内引起的异物反应。结果各组的神经干内均有纤维结缔组织轻度增生，但神经束的形态结构无明显变化；各种材料周围均有纤维假膜形成，假膜内有淋巴细胞和巨噬细胞浸润，而包裹壳聚糖的假膜最厚，细胞浸润最明显。结论聚乳酸、聚羟基乙酸和壳聚糖对外周神经均无毒性，可作为组织工程化神经的支架材料，但壳聚糖引起的异物反应较聚乳酸和聚羟基乙 酸明显。
生物材料， 生物相容性， 外周神经， 组织工程,， 壳聚糖
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刘小林， 朱庆棠， 朱家恺， 许扬滨， 闫玉华
中华显微外科杂志，2003，20（1）：33～35，-0001，（）：
-1年11月30日
目的研究聚乳酸微丝在神经干内的降解特点以及在降解过程中对外周神经的影响，探讨其是否适合作为组织工程化外周神经的支架。方法在20只sD大鼠两侧的坐骨神经内分别植入聚乳酸微丝（实验侧）和Vicryl微丝（对照侧），于术后1、4、8和l2周观察微丝的形态和神经组织结构的变化以及植入部位的组织和细胞反应。结果聚乳酸微丝植入神经干后在表面和内部同时发生崩裂，至12周时已大部分降解；在降解过程中始终伴随着巨噬细胞活跃的吞噬活动；两种微丝植入神经干后均引起类似的轻度异物炎性反应；在聚乳酸微丝的降解过程中，神经束和神经纤维的组织结构没有明显变化。结论聚乳酸微丝在外周神经内的降解时间超过12周；微丝在降解时引起的轻度非特异性炎性反应对神经组织没有不良影响。
聚乳酸， 降解， 外周神经， 组织工程
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刘小林， 王建云， 朱家恺， 李文萍， 向剑平
中华显微外科杂志，2002，25（3）：189～191，-0001，（）：
-1年11月30日
目的通过自体许旺细胞与化学萃取同种去细胞异体神经桥接物体外结合培养的研究，寻找一种在结构功能上与自体神经相似而抗原性少或无的物质来修复较长距离的神经缺损。方法使用近交系F344乳鼠和双差速贴壁及Arab-C抑制成纤维细胞生长的细胞培养方法来获得大量高纯度的许旺细胞。成年SD大鼠作为异体神经来源，利用化学萃取去除其中细胞成分以降低其抗原性，制备去细胞神经桥接物，再把前者通过微注射方法注入到后者内部继续培养观察细胞生长情况。用抗s100标记许旺细胞计算纯度，用HE染色、电镜观察神经萃取及细胞种植其内后生长情况。结果许旺细胞培养纯度达92%以上。Triton-X-100及脱氧胆酸钠具有完全萃取掉神经纤维中的许旺细胞及髓鞘，萃取后所得到的桥接物适合于许旺细胞体外生长，并且细胞在其内有迁移排成行的特性。结论通过化学萃取方法所得的异体去细胞神经桥接物种植自体许旺细胞后可能为一种理想的神经缺损修复材料。
许旺细胞， 外周神经， 化学萃取
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